在Drosophila幼虫中建立细菌感染

在石蜡膜上取一滴细菌病原体。

将一只 Drosophila 幼虫放置在细菌液滴中。

在体视显微镜下，使用钨针刺破幼虫，穿透其角质层（保护性外层）以及下方的表皮。

这使得细菌能够进入幼虫的血淋巴，即循环液体。

将感染的幼虫转移至含有酵母膏作为食物来源的带槽富营养琼脂平板上。

这些沟槽有助于幼虫迁移并防止脱水。

将剩余的细菌悬液加入培养皿中，并用石蜡膜密封。

将培养板置于湿润的孵育 chamber 中，以维持幼虫的存活能力。

在幼虫血淋巴内，一种称为血细胞的免疫细胞可识别细菌并启动吞噬作用。

尽管一些细菌在吞噬体-溶酶体融合后被清除，但另一些细菌通过延迟融合或抵抗细胞内应激而存活，并在血细胞内复制，导致持续性的胞内感染。

感染的 Drosophila 幼虫现已准备好用于宿主-病原体相互作用研究。

将酵母糊置于葡萄汁琼脂平板上。在琼脂上划出细小切口，以便幼虫迁移，避免干燥。

使用石蜡膜和持针钳组装一支尖端为 0.001 毫米的钨针。在体视显微镜下，将 50 µL 高滴度、表达 mCherry 的 C. Burnetii 滴加到石蜡膜上，并将幼虫放入细菌液滴中。用钨针刺破幼虫。

将幼虫转移至琼脂平板上。将剩余的病原体培养基也转移至该琼脂平板上，并用石蜡膜密封平板。将幼虫置于湿润空气中培养，直至达到所需的感染后时间点。对于感染C. Burnetii的幼虫，需在平板上培养24小时。