病原体感染的Drosophila 血细胞的高分辨率共聚焦成像

将载有固定血细胞的载玻片放置到共聚焦显微镜载物台上。

这些血细胞来源于感染了细菌病原体的黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）幼虫。

血细胞被标记上绿色荧光蛋白，其细胞核用蓝色染料染色，而细菌则表达红色荧光蛋白以便观察。

配置显微镜以同时检测三种荧光染料，从而同步追踪细胞区室和病原体。

使用高分辨率物镜，聚焦目标血细胞以捕捉亚细胞结构细节。

调节激光功率和检测器增益，以获得适当的样品曝光并优化信号清晰度。

扫描多个Z平面，以确保曝光水平适当。

设置顶部和底部的 Z 位置，以对整个血细胞进行成像。

使用扫描缩放功能定位目标血细胞，并获取高分辨率的三维图像。

该方法可实现病原体在血细胞内定位的可视化。

设置共聚焦显微镜以进行 DAPI、EGFP 和 mCherry 的三色成像。

将样品置于显微镜下，使用数值孔径为1.4的63倍物镜对样品进行聚焦。在视野中找到需要成像的目标血细胞。然后，调节激光功率和探测器增益，以获得适当的样品曝光。

检查多个Z平面，以确保整个样本厚度的曝光水平适当。接着，找到一个完整血细胞在Z轴方向的顶部和底部位置，并将这两个位置分别设为Z轴层切的起始和终止位置。

使用扫描缩放功能对含有血细胞的区域进行成像。以适当的分辨率采集图像序列，例如在X-Y平面为1024 × 1024像素，Z轴方向间距为0.3 µm。