小鼠脂多糖诱导急性肺损伤用于外泌体与免疫分析

从一只受约束的小鼠开始，以诱导急性肺损伤（ALI）。

取源自革兰氏阴性菌外膜的脂多糖，腹腔注射给药，然后将小鼠放回笼中。

脂多糖到达肺部后，会破坏肺微血管内皮屏障，并激活肺泡巨噬细胞，使其释放细胞因子和外泌体。

细胞因子激活肺内皮细胞并募集中性粒细胞。中性粒细胞释放活性氧和蛋白酶，损伤肺泡上皮和肺内皮屏障。

外泌体微小RNA下调上皮细胞和内皮细胞中连接蛋白的表达，进一步削弱屏障功能，导致液体和免疫细胞渗漏至肺泡腔，从而引发急性肺损伤（ALI）。

处死小鼠，进行颈部切口，暴露气管。

插入针头注入缓冲液，冲洗肺泡腔内的免疫细胞和外泌体。

插入新的针头以吸取肺泡液，将其转移至离心管中，并置于冰上保存，用于后续分析。

首先，用一支配备27号针头的1毫升注射器吸取每只小鼠0.1毫升LPS和PBS，然后手动固定第一只6至8周龄的雄性C57 black 6J小鼠。

通过腹腔注射给予LPS，并将动物放回笼中。24小时后，在第一只动物颈部中央做一个5毫米的切口，使用钝头镊子轻轻分离肌肉以暴露气管。接着，将连接无菌10毫升注射器的27号针头轻轻插入气管，注入1毫升无菌PBS。

然后立即用一个装有新27号针头的3毫升注射器替换10毫升注射器。抽吸支气管肺泡灌洗液（BOLF），并将BOLF加入预先标记好的15毫升锥形管中，置于冰上。