为什么零假设检验对剪切力依赖性黏附定量分析具有重要意义？

零假设检验能够客观评估在流动条件下观察到的细菌黏附是否显著不同于基线或对照条件，从而支持可靠的目标验证和机制层面的风险排除。

自变量隔离如何适用于体内 VWF 激活工作流程？

分离变量（如钙离子载体的应用）可将血管性血友病因子（VWF）链的形成和细菌聚集精确归因于特定触发因素，从而在发现流程中阐明其作用机制通路。

该模型中定量延时图像测量能够实现什么？

定量延时成像可提供细菌黏附事件的可重复性度量指标，从而实现不同实验组之间的统计学比较，并支持基于数据的决策推进。

为何可重复性要求对于跨学科传染病团队至关重要？

重复实验可确保观察到的黏附现象具有稳健性和可重复性，有助于各研究团队对数据建立信心，并支持协作开展的检测方法开发与验证工作。

在实施基于图像的黏附定量分析之前，需要具备哪些统计分析能力？

团队必须建立用于处理和分析延时成像的工作流程，包括阈值设定、事件计数和统计比较，以确保为研发决策提供可靠且可操作的结果。

一种用于研究剪切力依赖性细菌黏附的体内模型

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 3:50 分钟 • July 1st, 2026

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取一只禁食过夜以减少肠蠕动的麻醉小鼠。

涂抹眼药膏以防止角膜干燥。将其固定在加热垫上以调节体温。

暴露右侧颈静脉。插入导管，并用缝线固定。

打开腹腔，然后将小鼠置于透明板上。

展开肠管以暴露肠系膜（一种支持性膜），从而进入血管。

维持体温，并使用生理盐水以防止脱水。

将小鼠置于荧光显微镜下，然后固定血管。

使用一种可升高内皮细胞内钙离子水平的离子载体。这会触发血管性血友病因子（VWF）的释放，使其在细胞表面形成卷曲的丝状结构。

通过导管注入荧光标记的细菌以进入血管。

血流产生的剪切力使血管性血友病因子（VWF）纤维展开，进而与细菌黏附素结合并形成细菌聚集体。

拍摄延时图像以量化剪切力依赖性细菌黏附。

实验前一晚禁食六至八周龄小鼠，以减少肠道蠕动。实验当天，首先按每千克体重0.1毫克的剂量注射布托啡诺作为镇痛剂。随后，将小鼠麻醉，并在眼睛上涂抹眼膏。

将小鼠置于体视显微镜下的温控加热垫上，并检测小鼠无足底反射。沿颈静脉平行方向做一厘米切口。去除右侧颈部肌肉，然后从周围组织中分离出颈静脉。

将一根2法式静脉导管插入右侧颈静脉，并用缝线固定。然后，沿腹部正中线做切口以打开腹腔。将小鼠置于透明板上，使其右侧朝下，并用胶带固定导管。

使用棉签轻轻拉出肠管，展开肠系膜，以观察肠系膜小动脉和小静脉的血流情况。在小鼠身上放置加热垫以防止低体温，并每隔30分钟向肠管滴加500微升0.9% NaCl溶液，防止组织脱水。用棉签固定血管，并在倒置显微镜下进行观察。

接下来，局部应用5 µL溶于DMSO的10 mM钙离子载体溶液。这将激活血管内皮细胞释放血管性血友病因子。10秒后，通过颈静脉导管注射100 µL荧光标记的细菌。此时开始采集延时图像。使用工具栏中的采集工具进行延时成像，设置为每秒1000帧，共40个循环。图像采集完成后，根据机构指南处死小鼠。将图像保存为适当的图像文件格式，然后按照先前所述方法使用ImageJ分析软件处理图像。