一种用于研究剪切力依赖性细菌黏附的体内模型

取一只禁食过夜以减少肠蠕动的麻醉小鼠。

涂抹眼药膏以防止角膜干燥。将其固定在加热垫上以调节体温。

暴露右侧颈静脉。插入导管，并用缝线固定。

打开腹腔，然后将小鼠置于透明板上。

展开肠管以暴露肠系膜（一种支持性膜），从而进入血管。

维持体温，并使用生理盐水以防止脱水。

将小鼠置于荧光显微镜下，然后固定血管。

使用一种可升高内皮细胞内钙离子水平的离子载体。这会触发血管性血友病因子（VWF）的释放，使其在细胞表面形成卷曲的丝状结构。

通过导管注入荧光标记的细菌以进入血管。

血流产生的剪切力使血管性血友病因子（VWF）纤维展开，进而与细菌黏附素结合并形成细菌聚集体。

拍摄延时图像以量化剪切力依赖性细菌黏附。

实验前一晚禁食六至八周龄小鼠，以减少肠道蠕动。实验当天，首先按每千克体重0.1毫克的剂量注射布托啡诺作为镇痛剂。随后，将小鼠麻醉，并在眼睛上涂抹眼膏。

将小鼠置于体视显微镜下的温控加热垫上，并检测小鼠无足底反射。沿颈静脉平行方向做一厘米切口。去除右侧颈部肌肉，然后从周围组织中分离出颈静脉。

将一根2法式静脉导管插入右侧颈静脉，并用缝线固定。然后，沿腹部正中线做切口以打开腹腔。将小鼠置于透明板上，使其右侧朝下，并用胶带固定导管。

使用棉签轻轻拉出肠管，展开肠系膜，以观察肠系膜小动脉和小静脉的血流情况。在小鼠身上放置加热垫以防止低体温，并每隔30分钟向肠管滴加500微升0.9% NaCl溶液，防止组织脱水。用棉签固定血管，并在倒置显微镜下进行观察。

接下来，局部应用5 µL溶于DMSO的10 mM钙离子载体溶液。这将激活血管内皮细胞释放血管性血友病因子。10秒后，通过颈静脉导管注射100 µL荧光标记的细菌。此时开始采集延时图像。使用工具栏中的采集工具进行延时成像，设置为每秒1000帧，共40个循环。图像采集完成后，根据机构指南处死小鼠。将图像保存为适当的图像文件格式，然后按照先前所述方法使用ImageJ分析软件处理图像。