使用流式细胞术分析巨噬细胞受体与致病菌的相互作用

从含有宿主免疫受体的巨噬细胞蛋白提取物管开始。

加入灭活的致病菌，以提供针对致病菌株的特异性表面抗原。

在旋转条件下孵育，使免疫受体结合细菌抗原，形成受体-抗原复合物。

加入交联剂，并在振荡条件下孵育，以稳定受体-抗原复合物。

加入淬灭剂以终止交联反应。

加入缓冲液并离心，以沉淀复合物。

去除多余的试剂，然后将沉淀重悬于第二种交联剂中，以进一步稳定复合物。

用缓冲液离心并洗涤沉淀。

加入荧光标记的抗体并涡旋振荡。

在低温避光条件下孵育，以使抗体结合受体-抗原复合物。

在含有血清的缓冲液中重悬细胞。

最后，使用流式细胞术分析受体-抗原复合物。

当复合物通过激光时，会发出与受体-抗原结合相关的荧光信号，从而揭示宿主-病原体识别过程。

孵育一乘以十的六次方个完整灭活的 Mycobacterium tuberculosis 在4摄氏度下，将50微升来自1×10⁶个巨噬细胞的蛋白质提取物与细胞在旋转微量离心管架中孵育过夜。

第二天，为了染色蛋白-细菌复合物，向微量离心管中加入抗人SLAMF1抗体，涡旋混匀，在4摄氏度避光条件下孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤蛋白-细菌复合物后，将其重悬于FACS缓冲液中，并在流式细胞仪上检测样品。