0 次观看 • 2:26 分钟 • July 1st, 2026
从含有宿主免疫受体的巨噬细胞蛋白提取物管开始。
加入灭活的致病菌,以提供针对致病菌株的特异性表面抗原。
在旋转条件下孵育,使免疫受体结合细菌抗原,形成受体-抗原复合物。
加入交联剂,并在振荡条件下孵育,以稳定受体-抗原复合物。
加入淬灭剂以终止交联反应。
加入缓冲液并离心,以沉淀复合物。
去除多余的试剂,然后将沉淀重悬于第二种交联剂中,以进一步稳定复合物。
用缓冲液离心并洗涤沉淀。
加入荧光标记的抗体并涡旋振荡。
在低温避光条件下孵育,以使抗体结合受体-抗原复合物。
在含有血清的缓冲液中重悬细胞。
最后,使用流式细胞术分析受体-抗原复合物。
当复合物通过激光时,会发出与受体-抗原结合相关的荧光信号,从而揭示宿主-病原体识别过程。
孵育一乘以十的六次方个完整灭活的 Mycobacterium tuberculosis 在4摄氏度下,将50微升来自1×10⁶个巨噬细胞的蛋白质提取物与细胞在旋转微量离心管架中孵育过夜。
第二天,为了染色蛋白-细菌复合物,向微量离心管中加入抗人SLAMF1抗体,涡旋混匀,在4摄氏度避光条件下孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤蛋白-细菌复合物后,将其重悬于FACS缓冲液中,并在流式细胞仪上检测样品。
本文介绍了一种基于荧光的检测方法,用于研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)与免疫受体SLAMF1之间的相互作用。该实验方案利用流式细胞术检测并定量受体与抗原的结合事件,有助于揭示宿主与病原体之间识别机制的分子基础。
对巨噬细胞受体与致病菌相互作用进行定量分析,对于降低早期免疫学靶点的风险以及阐明宿主-病原体识别机制至关重要。基于流式细胞术的受体-抗原复合物检测可提高靶点验证的预测可信度,并为传染病研究中的项目筛选决策提供依据。该方法支持免疫调节策略从发现阶段到临床前评价的转化连续性。
这种基于流式细胞术的检测方法通过实现免疫受体的定量验证,并支持宿主-病原体相互作用的机制研究,从而融入从发现到临床前研究的连续过程。
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最后更新:29 八月 2026