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微生物学
0 次观看 • 3:20 分钟 • July 1st, 2026
从生长在浸没于缓冲液中的矿物圆盘上的多物种细菌口腔生物膜开始。
超声处理以破坏生物膜基质，制备均匀的单细胞悬液。
将该细菌悬液加入含有口腔组织模型的Transwell小室中，该模型由生长在膜上的口腔上皮细胞构成。
将插入片段放入含有培养基的新多孔板中。
孵育期间，细菌附着于上皮表面并定植，形成模拟口腔感染的生物膜。
这会触发上皮细胞中炎症信号分子的表达。
孵育后，取出小室并弃去残余悬液。
使用针头将上皮组织及其支撑膜一并切除，并转移至含有裂解缓冲液和玻璃珠的离心管中。
通过匀浆机械裂解上皮细胞和细菌，使细胞内含物释放到缓冲液中。
裂解液已准备好用于分析上皮细胞对口腔生物膜的反应。
同时，使用19号针头和镊子将羟基磷灰石圆片从24孔板底部取出，以去除生物膜。将圆片转移至含有1毫升无菌DPBS的毕久瓶中。
将圆片置于超声水浴中，在35千赫兹条件下超声处理10分钟。完成适应后，使用镊子从12孔板中取出组织插入物。用移液器直接将100微升生物膜超声悬浮液加到组织模型上。
将插入物转移至另一含有1毫升新鲜维持培养基的12孔板中。在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育组织模型24小时。进行组织处理时，在2毫升带螺帽和O形圈的离心管中加入350微升RLT裂解缓冲液（含1% β-巯基乙醇）。
向离心管中加入约 100 微升 0.5 毫米的酸洗玻璃珠。使用镊子将含有组织的插入物从培养基中取出，并弃去插入物中残留的微生物悬液。将插入物倒置至与视线齐平，然后使用 19 号针头小心地从插入物底部切下组织和膜。
将组织和膜转移至预装的RLT缓冲液中。使用台式珠磨匀浆器匀浆组织30秒。