评估小鼠模型中细胞内细菌的持续存在与抗生素耐药性

取两组已处死且暴露腹腔的小鼠。

对照组预先注射了感染耐甲氧西林S. aureus的巨噬细胞。

处理组预先注射携带相同细菌和抗生素庆大霉素的巨噬细胞。

在两组中，细菌均能在巨噬细胞吞噬体内部持续存在、复制并逃避免疫系统的攻击。在治疗组中，细菌还能抵抗抗生素作用并保持活性。

找到含有感染巨噬细胞的肾脏。小心地将肾脏从周围组织中分离下来。

将每个肾脏放入含有缓冲液的研磨管中，以维持细菌的活性。

匀浆组织以裂解巨噬细胞并释放胞内细菌。

将匀浆转移至离心管中，并在缓冲液中进行系列稀释。

将每个稀释液滴加到营养丰富的琼脂平板上。

孵育至可见菌落形成单位（CFUs）出现。

两组中相似的菌落形成单位（CFU）表明耐甲氧西林的S. aureus在宿主细胞内具有庆大霉素抗性并可持续存在。

将小鼠置于红外线理疗灯下，直至尾静脉扩张。将小鼠随机分为四组。通过尾静脉注射每只小鼠三乘以十的六次方CFU浮游态MRSA252。

24小时后，处死麻醉小鼠，并用75%乙醇彻底消毒。用一只手使用镊子提起腹部皮肤，另一只手用眼科剪剪开皮肤。在腹腔内找到肾脏，并小心将其完全剥离。

将肾脏转移至含有1毫升PBS的研磨管中，研磨至无固体组织残留。将匀浆后的组织倒入离心管中。用PBS对组织匀浆液进行系列稀释。

将每个稀释液分别点样到不同的胰蛋白酶大豆琼脂平板上，在37摄氏度下过夜培养。次日计数细菌菌落并分析数据。