利用哺乳动物细胞培养生产与收集假病毒颗粒

从一个含有贴壁哺乳动物细胞单层的培养皿开始。

取用无血清培养基稀释的工程假病毒颗粒。

该病毒含有冠状病毒刺突蛋白和一段编码绿色荧光蛋白（GFP）的RNA。

将病毒加入单层细胞中，并轻轻摇动孵育，以促进病毒吸附。

更换为含血清的培养基，再次孵育。

病毒刺突蛋白与宿主细胞受体结合，介导病毒进入并释放RNA到细胞质中。

RNA进行复制并合成病毒蛋白，包括GFP。新的病毒颗粒组装后离开细胞，进而扩散感染邻近细胞。

在荧光显微镜下观察细胞。

病毒感染的细胞呈现绿色荧光。

随着时间推移，受感染的细胞会受到损伤并从表面脱落，导致单层细胞出现空隙，但仍保持荧光。

将上清液转移至离心管中，离心以去除细胞碎片。

收集含有假病毒颗粒的上清液。

为制备用于滴定的VSV spike EGFP假病毒，用无血清DMEM将病毒原液稀释至12毫升，以0.01的感染复数感染细胞。

加入病毒后，将细胞在37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育1小时，期间偶尔轻轻摇动。孵育结束后，弃去接种液，更换为新鲜的DMEM培养基（添加2%胎牛血清和20毫摩尔HEPES），然后将细胞在34摄氏度、5%二氧化碳条件下继续孵育24小时。次日，使用荧光显微镜观察感染细胞中EGFP的表达情况。

当观察到明显的细胞病变效应和细胞脱落时，收集培养上清液，并通过离心去除碎片。