在巨大单层囊泡膜上可视化病毒结构蛋白的组装

从含有YFP标记的病毒结构蛋白的翻译反应混合物开始。

病毒的结构蛋白带有 YFP 标签以便观察，并含有可实现膜结合的脂肪酸。

接下来，将反应混合物的一份等分试样加入含有巨大单层囊泡（GUVs）的离心管中，GUVs 是模拟细胞膜的大型脂质球体，然后进行孵育。

病毒结构蛋白上的脂肪酸与GUV脂质层相互作用，使其能够附着在其表面，形成蛋白-GUV复合物。

结合后，病毒结构蛋白在囊泡膜上自我组装，模拟病毒颗粒形成的早期步骤。

将蛋白-GUV混合物转移至成像室中，并用盖玻片密封，以防止反应混合物蒸发。

使用荧光显微镜观察蛋白-GUV复合物。

在GUVs边界处的黄绿色信号代表病毒结构蛋白在其膜上的组装。

冷却后，小心将载玻片组件移至实验台，用镊子取下顶部的载玻片，轻柔地拆卸反应室。用剪去尖端的1000微升移液枪头将GUVs转移至新的离心管中。操作过程中应轻柔对待该离心管，并在90分钟内使用GUVs。

接下来，准备一个成像腔室。将带有小孔的聚二甲基硅氧烷（PDMS）片固定在干净的盖玻片上，轻轻而牢固地按压，以形成紧密的密封。

然后，将5 µL体外翻译反应液与5 µL GUVs混合。数分钟后，将混合物转移至成像室，并开始成像。为防止蒸发，可用盖玻片覆盖成像室。