分离 节杆菌属 从土壤样品中分离噬菌体

0 次观看3:32 分钟 • July 1st, 2026

取含有噬菌体的土壤提取物,包括 节杆菌属 噬菌体与培养基预先混合。

加入Arthrobacter细菌,并在振荡条件下孵育。

Arthrobacter 噬菌体附着在细菌表面并注入其DNA,以产生新的噬菌体。

宿主细胞裂解释放子代噬菌体,从而在培养基中富集Arthrobacter噬菌体。

稀释该培养基以降低噬菌体浓度。

加入新鲜的Arthrobacter细胞和钙离子,以促进噬菌体感染。

将样品与软琼脂混合后倒入营养琼脂平板中。凝固的软琼脂可固定细菌,限制噬菌体的扩散。

孵育后,每个噬菌体感染附近的宿主细胞,产生子代噬菌体并感染邻近的细菌,从而实现局部感染。

未感染的细菌细胞生长,而被感染的细菌细胞发生裂解,在细菌菌苔上表现为清晰的空斑区域,称为噬菌斑。

这些噬菌斑中含有子代噬菌体,可用于后续实验。

开始此操作时,将1至2.5毫升处于对数期末期或稳定期初期的细菌培养物加入每个含有滤膜灭菌LB土壤提取液混合物的锥形瓶中。如果培养物的OD 600为0.5至0.7,使用1毫升;如果OD600高于0.7,则使用2.5毫升。

将锥形瓶置于摇床培养箱中,在30摄氏度、250 RPM条件下振荡培养约24小时。24小时培养结束后,从摇床培养箱中取出富集用锥形瓶,用噬菌体缓冲液将富集样品稀释十倍。

在培养管中加入0.5毫升处于对数期末期或稳定期初期的细菌培养物。向各培养管中加入5微升至500微升不等的稀释后富集培养物。

向培养管中加入氯化钙,使5毫升培养液中的终浓度与原始富集瓶中的浓度相同。使用一系列不同浓度的氯化钙,以筛选出具有不同氯化钙依赖性的多种噬菌体。每管培养液中加入4.5毫升LB上层琼脂,混匀后倾注至LB琼脂平板上。

轻轻混匀,使液体均匀分布于平板表面,静置约15分钟,待顶层琼脂凝固。将平板倒置,于30摄氏度培养过夜至48小时。根据所含噬菌体的特性调整培养时间以优化结果。

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最后更新:29 八月 2026