活体成像观察HIV-1感染人巨噬细胞中吞噬体的迁移

将含有表达 Fc 受体的人单核细胞来源巨噬细胞的成像培养皿置于共聚焦显微镜载物台上进行活体成像。

这些巨噬细胞预先感染了一种表达绿色荧光蛋白（GFP）的HIV-1毒株。

识别并聚焦单个GFP阳性的巨噬细胞，以确保清晰的可视化。

移除培养皿，并向巨噬细胞加入经IgG包被的绵羊红细胞或SRBCs。

短暂离心培养皿，以促进巨噬细胞上的 Fc 受体与 SRBCs 上的 IgG 相互作用，从而实现内化和吞噬体形成。

将培养皿放回显微镜并重新对焦。

设置Z轴成像参数，并采集细胞的荧光和明场图像。

使用荧光通道识别表达GFP的HIV感染细胞，并使用明场通道追踪内化后的非荧光吞噬体的运动。

该方法能够实现对感染HIV的巨噬细胞中吞噬体迁移的实时可视化观察。

将成像培养皿置于显微镜载物台上。调节焦距和位置，使视野中仅包含一个完整的 HIV-1 感染巨噬细胞。

根据所使用的成像系统和探针，选择合适的激发和发射参数。包含明场通道，并通过调整曝光时间优化其成像效果。

接下来，移去成像培养皿，向培养皿中加入1毫升绵羊红细胞（SRBC）悬液，其浓度为每毫升7×10⁶个SRBC。在室温下以500×g离心2分钟，以同步吞噬作用；离心结束后记录时间，然后将培养皿放回显微镜载物台。优化焦平面，并以0.3微米为步距设置成像序列的顶部和底部位置。

开始采集细胞全厚度范围内的GFP和明场图像的Z轴层扫数据，并以成像系统的原生文件格式保存延时视频。