利用无细胞转录-翻译系统合成噬菌体

取含有核糖体、RNA聚合酶和DNA降解酶的粗制细菌细胞提取物。

加入含有核苷酸、tRNA 和高能磷酸供体的能量缓冲液混合物。

加入氨基酸混合物和一种抑制DNA降解酶的抑制剂，以防止DNA降解。

加入噬菌体 DNA，并混匀溶液。

最后，加入一种分子拥挤剂，以模拟细胞内拥挤的环境。

涡旋振荡溶液以充分混匀，然后孵育。

该溶液现在含有无细胞转录-翻译或 TXTL 系统所需的基本分子机制。

噬菌体DNA被RNA聚合酶转录为信使RNA或mRNA。

mRNA 随后招募核糖体以启动翻译过程，其中 tRNA 利用高能磷酸供体提供的能量将氨基酸递送至核糖体，用于合成病毒蛋白。

噬菌体 DNA 和病毒蛋白会自我组装形成新的噬菌体颗粒。

由无细胞TXTL系统合成的噬菌体已可用于进一步分析。

进行无细胞反应时，将粗提物按终反应体积的33%分装至微量离心管中。根据文本方案配制主混合液，并将各组分的适当体积加入粗提物中。

加入最后一个组分后，通过涡旋振荡使反应体系混匀。然后将主混合液分装至 n 个微量离心管中。接着，向主混合液阵列中加入指定体积的可变组分。

在涡旋振荡前，向每个反应体系中加入水，以达到所需的最终反应体积。然后将微量离心管在29摄氏度下孵育至少八小时或过夜。