0 次观看 • 3:36 分钟 • July 1st, 2026
从含有噬菌体和宿主细菌碎片的悬液开始。
为了纯化噬菌体,需依次将高密度和低密度的蔗糖溶液加入超速离心管中。
使用梯度形成仪器,通过倾斜试管旋转混合蔗糖溶液,以形成连续的密度梯度。
从蔗糖梯度顶部移除少量溶液,然后小心加入噬菌体-碎片混合物,避免扰动梯度。
使用超速离心机,根据噬菌体和细菌碎片的密度差异,促进其差速迁移。
噬菌体在梯度中点处形成一条浓稠、乳白色的条带。
使用带有钝头套管的注射器吸取噬菌体条带,并将其转移至超速离心管中。
加入缓冲液并轻轻混匀。
再次超速离心以沉淀噬菌体。弃去上清液。
加入缓冲液并在低温条件下孵育,以使噬菌体重新悬浮。
纯化的噬菌体可用于进一步的研究。
用移液器将2.5毫升45%蔗糖溶液加入四个超速离心管中,制备四管5%至45%的蔗糖梯度。然后在蔗糖层上方加入约2.6毫升5%蔗糖溶液,当液面距离管口2毫米时停止加液。
使用梯度形成仪以86度角、23转/分钟的速度倾斜旋转离心管43秒,混匀梯度。用1毫升移液器吸取500微升混合的噬菌体悬液,将吸头接触液面,极其缓慢地将液体加至蔗糖梯度顶部,注意避免因快速移液造成混合。在70,000 × g条件下离心 g 4摄氏度下孵育20分钟。
将钝头套管浸入溶液中,直至其尖端位于噬菌体条带最上缘的正中央。通过拉动注射器活塞,吸出大部分噬菌体条带。随后,将含有悬浮噬菌体的蔗糖溶液分装至三到四个超速离心管中。
用预冷的1× TM缓冲液将离心管加液至距管口3至4毫米处。用石蜡膜封口,倒置混匀。将离心管放回超速离心机,以145,000 × g离心 g 4摄氏度下孵育1小时
迅速倒掉上清液,并将离心管倒置在一次性擦拭纸上沥干。将 200 至 400 微升预冷的 1x TM 缓冲液平均加入所有沉淀中,于 4 °C 下过夜重悬。无需振荡。
本文展示了一种利用蔗糖密度梯度和超速离心从含有宿主细菌碎片的混合物中纯化噬菌体的实验方案。该方法可实现对具有感染性噬菌体的有效分离与回收,适用于后续应用。
噬菌体的可靠纯化对于生成高质量病毒储备液至关重要,这些病毒储备液广泛用于早期发现、检测方法开发以及机制研究。蔗糖密度梯度超速离心法能够有效去除宿主来源的污染物,支持可重复的下游分析及跨功能的研发工作流程。该能力为基于病毒学的筛选和转化研究流程提供了可靠的预测依据。
该纯化方法位于早期发现与检测开发的交汇点,可为下游的机制研究、筛选及转化工作流程提供高质量的病毒储备液。
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最后更新:22 八月 2026