使用蔗糖密度梯度纯化噬菌体

0 次观看3:36 分钟 • July 1st, 2026

从含有噬菌体和宿主细菌碎片的悬液开始。

为了纯化噬菌体,需依次将高密度和低密度的蔗糖溶液加入超速离心管中。

使用梯度形成仪器,通过倾斜试管旋转混合蔗糖溶液,以形成连续的密度梯度。

从蔗糖梯度顶部移除少量溶液,然后小心加入噬菌体-碎片混合物,避免扰动梯度。

使用超速离心机,根据噬菌体和细菌碎片的密度差异,促进其差速迁移。

噬菌体在梯度中点处形成一条浓稠、乳白色的条带。

使用带有钝头套管的注射器吸取噬菌体条带,并将其转移至超速离心管中。

加入缓冲液并轻轻混匀。

再次超速离心以沉淀噬菌体。弃去上清液。

加入缓冲液并在低温条件下孵育,以使噬菌体重新悬浮。

纯化的噬菌体可用于进一步的研究。

用移液器将2.5毫升45%蔗糖溶液加入四个超速离心管中,制备四管5%至45%的蔗糖梯度。然后在蔗糖层上方加入约2.6毫升5%蔗糖溶液,当液面距离管口2毫米时停止加液。

使用梯度形成仪以86度角、23转/分钟的速度倾斜旋转离心管43秒,混匀梯度。用1毫升移液器吸取500微升混合的噬菌体悬液,将吸头接触液面,极其缓慢地将液体加至蔗糖梯度顶部,注意避免因快速移液造成混合。在70,000 × g条件下离心 g 4摄氏度下孵育20分钟。

将钝头套管浸入溶液中,直至其尖端位于噬菌体条带最上缘的正中央。通过拉动注射器活塞,吸出大部分噬菌体条带。随后,将含有悬浮噬菌体的蔗糖溶液分装至三到四个超速离心管中。

用预冷的1× TM缓冲液将离心管加液至距管口3至4毫米处。用石蜡膜封口,倒置混匀。将离心管放回超速离心机,以145,000 × g离心 g 4摄氏度下孵育1小时

迅速倒掉上清液,并将离心管倒置在一次性擦拭纸上沥干。将 200 至 400 微升预冷的 1x TM 缓冲液平均加入所有沉淀中,于 4 °C 下过夜重悬。无需振荡。

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最后更新:22 八月 2026