扩增与回收感染性噬菌体

0 次观看2:40 分钟 • July 1st, 2026

取一培养物,其中细菌已被噬菌体感染。

切除噬菌体诱导细菌裂解形成的噬斑,即清晰的透明区域。

将噬菌斑接种到处于活跃生长期的细菌培养物中,并进行培养。

噬菌体将其基因组注入宿主细胞,随后基因组进行复制,并指导宿主细胞的合成机制产生结构蛋白。

这些颗粒随后组装成成熟的病毒粒子,并在宿主细胞内积聚。

加入DNA降解酶以去除来自裂解细胞的胞外细菌DNA。将悬液转移至玻璃瓶中。离心以沉淀细菌,并弃去上清液。

加入含有DNA降解酶的富镁缓冲液,并重悬细菌。

转移悬浮液,加入氯仿,振荡以裂解细胞并释放噬菌体颗粒。

镁可稳定噬菌体颗粒,而酶可降解残留的宿主DNA。

离心去除细胞碎片,将含有感染性噬菌体的上清液转移至新管中。于低温保存,以备后续研究。

按照文本方案中的描述,首先准备噬菌斑。使用无菌巴斯德吸管的末端切取并移除单个噬菌斑。

将噬菌斑吹入稀释的细胞中,然后在37摄氏度下孵育两小时。

接着,在8,000 × g离心细胞前加入DNase g 在4摄氏度下。

弃去上清液,然后将沉淀重悬于10毫升1× Tris氯化镁溶液中。加入500微升氯仿,高速涡旋以裂解细胞。在4°C下以12,000 × g 离心10分钟,澄清溶液。

然后将上清液倾入一个15毫升的锥形管中,并在4摄氏度下保存。