JoVE 实验百科全书
微生物学
0 次观看 • 2:40 分钟 • July 1st, 2026
取一培养物,其中细菌已被噬菌体感染。
切除噬菌体诱导细菌裂解形成的噬斑,即清晰的透明区域。
将噬菌斑接种到处于活跃生长期的细菌培养物中,并进行培养。
噬菌体将其基因组注入宿主细胞,随后基因组进行复制,并指导宿主细胞的合成机制产生结构蛋白。
这些颗粒随后组装成成熟的病毒粒子,并在宿主细胞内积聚。
加入DNA降解酶以去除来自裂解细胞的胞外细菌DNA。将悬液转移至玻璃瓶中。离心以沉淀细菌,并弃去上清液。
加入含有DNA降解酶的富镁缓冲液,并重悬细菌。
转移悬浮液,加入氯仿,振荡以裂解细胞并释放噬菌体颗粒。
镁可稳定噬菌体颗粒,而酶可降解残留的宿主DNA。
离心去除细胞碎片,将含有感染性噬菌体的上清液转移至新管中。于低温保存,以备后续研究。
按照文本方案中的描述,首先准备噬菌斑。使用无菌巴斯德吸管的末端切取并移除单个噬菌斑。
将噬菌斑吹入稀释的细胞中,然后在37摄氏度下孵育两小时。
接着,在8,000 × g离心细胞前加入DNase g 在4摄氏度下。
弃去上清液,然后将沉淀重悬于10毫升1× Tris氯化镁溶液中。加入500微升氯仿,高速涡旋以裂解细胞。在4°C下以12,000 × g 离心10分钟,澄清溶液。
然后将上清液倾入一个15毫升的锥形管中,并在4摄氏度下保存。