利用胚胎肾细胞生成重组病毒颗粒

从含有质粒与钙离子和磷酸根离子形成的细小沉淀的转染混合物开始。

这些质粒编码病毒蛋白和目的基因。

将此溶液逐滴加入胚胎肾细胞的单层中。

轻轻摇晃培养板，以确保均匀分布。

孵育细胞，使沉淀物结合到细胞表面。

现在向培养基中添加血清以支持细胞存活。

钙离子和磷酸根离子通过内吞作用促进质粒-沉淀物的内化。

质粒进入细胞核后，质粒编码的基因得以表达，从而产生病毒蛋白。

质粒还会被转录以生成包含目的基因的病毒RNA基因组。

这些组分在细胞质内组装成病毒颗粒。

随后，携带目的基因的重组病毒颗粒从细胞质膜出芽并释放到培养基中，从而实现随时间的持续生产。

将2.5毫升质粒混合物逐滴加入每个15厘米培养皿中。然后轻轻摇动培养皿，并在37°C、5%二氧化碳条件下孵育2至3小时。

孵育3小时后，向每孔加入2.5毫升含10%血清的培养基，继续过夜培养。