利用流式细胞术对EBV感染的细胞系进行表型分析

0 次观看3:14 分钟 • June 30th, 2026

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取自感染了EBV(Epstein-Barr病毒)的患者建立的淋巴样细胞系。

这些细胞表达致癌病毒蛋白,可激活信号通路,促进细胞永生化,并呈现以HLA-DR表达为标志的持续活化状态,HLA-DR是一种参与抗原呈递的分子。

将试管离心并用缓冲液洗涤细胞。

加入血清以阻断非特异性结合位点。离心细胞,并加入缓冲液。

将每份悬液分装至离心管中,然后离心。

向每个试管中加入一对独特的荧光标记抗体,其中一种抗体标记绿色荧光基团,另一种标记红色荧光基团,分别靶向特定的表面标志物。

离心试管,加入缓冲液洗涤细胞,并重新悬浮。

使用流式细胞术检测标记物的荧光信号。

两条细胞系均表达 HLA-DR,表明存在 EBV 驱动的免疫活化,但在谱系特异性标志物上存在差异,可确认其中一条为 T 细胞系,另一条为 NK 细胞系。

细胞扩增后,收集1 × 10⁶个细胞以确定细胞系的表型。室温下以240 × g离心5分钟,沉淀NKNT细胞。

随后,弃去上清液,加入 7 毫升 PBS 重悬沉淀。在室温下以 240 × g 离心 5 分钟。重复此步骤一次。然后,向每根试管中加入 200 微升人血清,充分混匀,并在室温下孵育 10 分钟。将细胞在室温下以 240 × g 离心 5 分钟。

弃去上清液,并用预冷的PBSA缓冲液将细胞重悬至每毫升含1 × 10⁶个细胞。随后,将细胞分装至五个离心管中,每管含2 × 10⁵个细胞。接着,在4°C条件下以240 × g离心5分钟。弃去上清液,并用PBSA缓冲液或含有10 µL PE和10 µL FITC标记抗体的PBSA缓冲液在冰上重悬细胞,以对T细胞或NK细胞的细胞表面受体进行染色。

使用 PBSA 缓冲液悬浮的细胞作为阴性对照。接下来,将细胞与抗体在冰上避光孵育 20 至 30 分钟。用冷的 PBSA 洗涤细胞两次,然后在使用流式细胞仪分析前,将细胞重悬于 300 微升冷的 PBSA 中。

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最后更新:15 八月 2026