免疫染色法用于可视化昆虫肠道中病毒抗原与宿主蛋白的共定位

从携带植物病毒的昆虫体内取出经化学固定的肠道组织。
用缓冲液清洗以去除固定剂。
加入非离子型去污剂以通透细胞膜。
再次清洗以去除去污剂残留。
加入含有两种不同荧光抗体及封闭剂的溶液。
孵育过程中，封闭剂可饱和非特异性结合位点，同时抗体进入细胞质。
其中一种抗体结合宿主细胞囊泡内的病毒抗原，另一种抗体结合囊泡相关膜蛋白。
清洗以去除未结合的抗体。
加入可结合肌动蛋白纤维的荧光染料，以显示宿主细胞结构。
清洗以去除未结合的染料。
将染色后的肠道组织置于含有荧光核染料的封片剂中，以标记细胞DNA。
利用共聚焦显微镜观察绿色与红色荧光信号的共存情况，表明病毒抗原与膜蛋白的共定位。

按照文稿中的描述准备抗体和封片介质。

将新解剖并用 PBS 清洗的 WBPH 肠道组织放入含有 100 微升 4% 多聚甲醛的 200 微升离心管中，于室温下固定。两小时后，弃去多聚甲醛溶液，加入 200 微升 PBS。10 分钟后，移除 PBS 以彻底清除残留的多聚甲醛，并重复 PBS 洗涤步骤两次。

经过两次 PBS 洗涤后，加入 200 微升非离子型去垢剂 Triton X-100，在室温下对样本进行通透处理。30 分钟后，移除 Triton X-100，并用 PBS 洗涤三次，每次 10 分钟，以去除残留的去垢剂。用 50 微升牛血清白蛋白将标记抗体稀释至 1:50。

将稀释后的抗体加入离心管中，于4摄氏度孵育过夜。次日早晨，在去除抗体后，用PBS洗涤三次，每次10分钟，以去除残留的抗体稀释液。取1微升Dylight 633-Phalloidin与50微升PBS混合稀释，取50微升稀释后的鬼笔环肽（Phalloidin）加入离心管中，室温孵育2小时。

去除鬼笔环肽后，用 PBS 进行三次、每次 10 分钟的充分洗涤，彻底洗去残留的鬼笔环肽。在显微镜载玻片上滴加含 DAPI 的封片液，将肠道组织转移至封片液中，轻轻盖上盖玻片，避免产生气泡。