基于阴离子交换树脂的生物气溶胶病毒检测

取一个已用于从生物气溶胶中捕获RNA病毒的液体冲击式采样器。
冲击液中含有阴离子交换树脂。该树脂带有带正电荷的功能基团，可通过静电吸引富集带负电荷的病毒颗粒。
将液体转移至离心管中，静置使树脂沉淀。
移除上清液。
加入含有载体RNA的病毒裂解缓冲液并进行孵育。
该缓冲液可裂解病毒颗粒，同时载体RNA作为共沉淀剂，有助于在RNA提取过程中提高病毒RNA的回收率。
收集裂解产物并提取RNA。
进行定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR），首先将RNA逆转录为互补DNA（cDNA）。
然后利用病毒基因特异性引物对cDNA进行多次扩增，产生大量DNA拷贝用于定量分析。
若出现阳性扩增曲线，则证实该生物气溶胶中存在目标病毒。

为了直接从阴离子交换树脂中分离核酸，将液体冲击式采集器中含有阴离子交换树脂的液体全部转移至单独的无菌50毫升锥形管中。待树脂沉降后，使用1毫升移液器吸头缓慢倾去阴离子交换树脂上的液体样本，并用吸头小心吸除树脂中残留的液体。

接下来，将560 µL含有载体RNA的病毒裂解缓冲液（来自病毒RNA提取试剂盒）直接加入阴离子交换树脂中，室温下孵育10分钟，并定期混匀。孵育结束后，使用1 mL移液枪头将病毒裂解液转移至无菌的1.5 mL离心管中，并按照试剂盒制造商的说明进行RNA提取。随后，每份样本使用5 µL核酸洗脱液，进行定量实时PCR，以检测MS2噬菌体以及甲型和乙型流感病毒。