从受精鸡胚中扩增与收获流感病毒

从一个含有受精鸡胚的孵育器开始。
尿囊腔是一个充满液体的腔室，其内壁为富含血管的上皮细胞，预先接种流感病毒。
在孵育过程中，病毒与上皮细胞相互作用，并通过内吞作用进入细胞内部。
随后，病毒将与核蛋白结合的病毒RNA片段释放到细胞质中。
释放的病毒RNA作为模板，用于合成新的病毒RNA和蛋白质。
新合成的病毒RNA和蛋白质组装成新的病毒颗粒，并以出芽方式进入尿囊液中。
将鸡蛋在低温下孵育以杀死胚胎并收缩血管。
将鸡蛋放置成气室朝上，并进行表面消毒。
打开蛋壳，去除保护性膜。
将胚胎和卵黄囊移开，收集富含病毒的液体至离心管中。
通过离心去除碎片，收集富含病毒的上清液，并在低温下保存以用于后续实验。
将感染的鸡蛋在37摄氏度、60%湿度条件下静置孵育，孵育时间根据流感病毒类型确定，以获得最佳效果。
孵育结束后，将鸡蛋在4摄氏度下至少冷藏4小时，以杀死胚胎并收缩血管。待鸡蛋充分冷却后，将其转移至生物安全柜中的稳固支架上，并用70%乙醇清洁蛋壳表面。
然后使用无菌剪刀剪开第一个鸡蛋气室上方的蛋壳。去除气室周围的蛋壳碎片，注意不要损伤绒毛尿囊膜。
接着使用无菌钝头镊子打开绒毛尿囊膜，并用小刮勺或小勺轻轻将胚胎和卵黄囊移至一侧，注意避免破坏卵黄。
随后，使用1毫升Eppendorf移液枪小心吸取尿囊液，必要时将鸡蛋倾斜以尽可能收集更多液体。每个鸡蛋通常可收获5至10毫升略带黄色的液体。
将收集的尿囊液汇集于预冷的50毫升塑料锥形管中，并置于冰上。待所有液体收集完毕后，离心去除颗粒物，将澄清的上清液转移至新的预冷50毫升管中，置于冰上。最后，将废弃的鸡蛋放入BSL-2级生物废物容器中处理，并立即对澄清的尿囊液进行分装。
随后将病毒在液氮中速冻，并将冻存管置于-80摄氏度超低温冰箱中长期保存。