在哺乳动物细胞中增殖与收获溶瘤单纯疱疹病毒

取一培养皿处于生长培养基中的哺乳动物细胞，移除培养基并用缓冲液洗涤。
加入溶瘤性单纯疱疹病毒悬液，并轻轻振荡以确保分布均匀。
在孵育过程中，病毒糖蛋白与宿主细胞受体结合，从而实现吸附。
移除未吸附的病毒，加入新鲜培养基。
继续孵育后，病毒包膜与宿主细胞膜融合，将核衣壳释放至细胞质中。
核衣壳将病毒基因组运送至细胞核，在核内劫持宿主细胞的复制机制以产生子代病毒。
不断升高的病毒载量导致细胞结构损伤。
收集条件培养基，并用刮刀刮取使细胞脱落；将细胞悬液转移至离心管中，离心收集细胞。
弃去上清液，用缓冲液和条件培养基重悬细胞，以维持病毒的稳定性。
迅速冷冻病毒悬液，并于超低温条件下保存，以保护病毒结构完整性。

首先用含1% IFCS的高糖DPBS洗涤T-150平方厘米培养瓶两次。吸除DPBS后，每瓶加入7毫升病毒接种物。

将锥形瓶轻轻摇动5分钟，于37摄氏度孵育1.5至2小时。然后，移除接种物，并向每个锥形瓶中加入25毫升添加了1% IFCS的DMEM培养基。在37摄氏度及5%二氧化碳条件下孵育2至4天后，从每个锥形瓶中收集20毫升培养上清液至50毫升离心管中。

使用细胞刮刀将细胞从培养瓶底部刮下。向每个培养瓶中加入约15毫升先前收集的培养上清液，使总体积达到20毫升，然后用10毫升无菌血清移液管轻轻吹洗培养瓶底部数次。将含有培养基的细胞收集至置于冰上的50毫升锥形离心管中。

在4°C条件下，以300 × g 离心10分钟。将每个沉淀物充分重悬于1.25毫升病毒缓冲液（VB）和1.25毫升先前收集的培养上清液中。将所有重悬的沉淀物混合至一个50毫升锥形离心管中。使用干冰和100%乙醇快速冷冻重悬的细胞，并于-80°C保存。