从感染的哺乳动物细胞中纯化溶瘤病毒

取一株经溶瘤病毒感染的哺乳动物细胞悬液。

进行超声处理以裂解细胞，使病毒释放到溶液中。

加入DNase及其辅因子，充分混匀后孵育。

辅因子激活DNase，该酶可降解宿主DNA，从而降低裂解液的黏度。

离心裂解液以沉淀宿主细胞碎片。

收集上清液，并通过膜过滤以去除较大的宿主污染物。

使用孔径逐渐减小的滤膜重复过滤两次。这可以去除较小的污染物，同时将病毒保留在滤液中。

将滤液小心地铺在高密度蔗糖溶液上，然后高速离心。

病毒迁移至试管底部，而较轻的污染物则留在上清液中。

弃去上清液和蔗糖层。

加入可维持病毒完整性的稳定缓冲液，然后涡旋振荡以重悬病毒。

纯化的病毒现已可用于进一步的研究。

将先前速冻的细胞在37摄氏度的温水浴中解冻，并在水浴中进行三次超声处理，每次一分钟。每毫升细胞裂解液中加入175单位的苯并核酸酶（Benzonase Nuclease）和两微升浓度为二毫摩尔的氯化镁，然后涡旋振荡。

30分钟孵育并在37摄氏度温水中孵育后，将试管置于冰上。以300 × g 离心10分钟裂解细胞。将上清液收集至一个新的50毫升锥形离心管中。通过无菌的5微米PVDF膜滤器将上清液过滤至另一个标记为“管一”的50毫升离心管中。向过滤上清液后腾空的50毫升离心管中加入1毫升VB，涡旋混匀，然后将其通过置于“管一”上的同一PVDF膜滤器进行过滤。

将1号管的滤液通过置于新标记的50毫升离心管（称为2号管）上的无菌0.8微米MCE膜滤器。向已排空的1号管中加入1毫升VB，涡旋混匀，然后通过同一置于2号管上的MCE滤器。将2号管的滤液通过置于新标记的50毫升离心管（标记为3号管）上的无菌0.45微米PVDF滤器。如前所述，用1毫升VB重复洗涤2号管，以将滤液加入3号管中。