利用质粒转染在人源细胞中生产假病毒

从含有在营养丰富的培养基中培养的人胚胎肾细胞的培养瓶开始。

用含有氯喹的新鲜培养基替换原有培养基，以增强质粒向细胞内的递送。

取编码流感表面蛋白、慢病毒核心蛋白和慢病毒基因组的质粒混合物，并加入磷酸钙，孵育以形成磷酸钙–DNA 复合物。

将混合物加入细胞中，轻轻混匀。孵育以使复合物通过内吞作用进入细胞。氯喹可促进质粒DNA从内体中逃逸。

在细胞内，质粒DNA驱动流感病毒和慢病毒组分的表达。

更换培养基以去除过量的复合物。

孵育以使病毒组分组装并出芽形成假病毒，释放到培养基中。

收集含有假病毒的培养基，并离心以沉淀细胞碎片。

收集含有假病毒的上清液，并于低温下保存，用于后续检测。

首先，在完全 DMEM 培养基中制备 HEK 293FT 细胞的单细胞悬液。将 10 mL 单细胞悬液加入 T75 培养瓶中，随后在 37 °C 条件下孵育。

转染前 2 小时，将旧培养基更换为含有氯喹的 10 mL 新鲜完全培养基。按照文中的描述混合试剂和质粒 DNA。然后将该混合物加入细胞上方的培养基中，并轻轻摇动。

孵育后，将培养基更换为十五毫升新鲜的完全DMEM培养基。六十五小时后，通过离心收集上清液。收集上清液并分装。