利用荧光素酶报告基因检测评估假病毒感染

从感染了假病毒的上皮细胞培养物开始，该假病毒是一种经过基因改造的非致病性病毒。

假病毒携带一种荧光素酶报告基因，可在感染的宿主细胞中表达荧光素酶。

移除孔中的培养基。

用缓冲液清洗以去除任何残留的培养基。

向孔中加入有助于细胞裂解的裂解缓冲液。

在超低温条件下孵育以冻存细胞。

在室温下解冻细胞。

冻融过程可确保细胞完全裂解，释放出包括荧光素酶在内的细胞内组分。

将细胞裂解液转移至不透光的培养板中，以减少发光检测过程中的背景信号。

加入底物。

裂解液中的荧光素酶与底物发生反应，发出光。

通过检测发射的发光信号来定量测定假病毒的感染水平。

进行荧光素酶检测时，小心移除培养基，并用 200 微升 PBS 洗涤细胞。

尽可能吸除 PBS，然后向每个孔中加入 50 毫升裂解缓冲液。次日，将培养板在室温下平衡 2 小时，随后轻轻摇动培养板数次，将全部细胞裂解液转移至不透光的 96 孔板中。向每孔加入 50 微升底物，并充分混匀。

使用光度计检测假病毒的荧光素酶滴度。