基于马铃薯病毒X的马铃薯植株microRNA沉默

取一株体外培养的马铃薯植株。

接下来，使用含有转移DNA（T-DNA）的重组Agrobacterium（农杆菌），一种植物病原菌。

T-DNA 携带一个全长的马铃薯X病毒基因组，经改造后可编码一种非编码RNA，以螯合特定的植物微小RNA（miRNA）。

用携带细菌的牙签对叶片进行侵染，并刮擦植株茎部。

在接种位点，细菌切除T-DNA并将其以单链DNA形式转移至植物细胞中。

利用宿主细胞的分子机制，T-DNA产生病毒基因组RNA，该RNA进行复制并表达非编码RNA和病毒蛋白。

该非编码RNA与靶标植物微小RNA结合，阻止其与靶标mRNA结合，从而抑制由此引发的发育缺陷。

与此同时，病毒基因组RNA形成核糖核蛋白复合物，通过胞间连丝进行系统性传播，从而实现植物全株的微小RNA（miRNA）沉默。

叶片异常，包括异位增生和喇叭形叶片，表明被沉默的微小RNA在发育过程中发挥作用。

当600纳米处的光密度达到1.0时，通过离心收集Agrobacterium液体培养物，并用足量的侵染缓冲液重悬菌体沉淀，使600纳米处的光密度调整至1.0。

室温孵育六小时后，用无针头的1毫升注射器吸取 农杆菌 悬浮并用一只手翻转和握住一株马铃薯植物的一片展开叶片。

用一根手指在叶片近轴面的预定浸润位置支撑住叶肉，另一只手保持注射器垂直于叶面，将一百至二百微升的 Agrobacterium 菌液浸润到叶肉的远轴面。

接下来，用牙签从农杆菌（Agrobacterium）培养平板上挑取菌落，轻轻刮擦已浸润的马铃薯植株第一个或第二个节间的茎表面及表皮。然后将浸润后的植株在温室中培养两至四周。