AAV介导的基因递送用于可视化受损的视网膜膜完整性

从先前注射了携带目的基因（编码荧光蛋白）的腺相关病毒（AAV）的转基因小鼠眼球开始。

小鼠缺乏一种对维持内界膜（ILM）完整性至关重要的基因，该膜是分隔视网膜与玻璃体腔的屏障。

该基因的缺失会模拟视网膜变性，使病毒能够更深入地穿透视网膜细胞层。

被感染的视网膜细胞表达目的基因，产生荧光蛋白，从而使其发出荧光。

现在，解剖眼球并移除角膜和晶状体。

小心地将视网膜从视网膜色素上皮（RPE）和巩膜（眼球的外层）上分离。

将组织浸入固定液中。

用磷酸盐缓冲液洗涤以去除残留的固定剂。

在共聚焦显微镜下观察时，视网膜细胞中的荧光表明病毒已成功穿透受损的内界膜。

为便于视网膜平铺标本的制备，将摘除的眼球在4%多聚甲醛中固定15至30分钟，以利于解剖。此次固定以及解剖后的固定步骤必须正确执行，因为这对保存GFP荧光至关重要。固定15至30分钟后，在此时间内解剖眼球，去除角膜和晶状体。

通过在锯齿缘和视神经周围进行切割，将视网膜与视网膜色素上皮层及巩膜分离。解剖完成后，将视网膜置于4%多聚甲醛中再固定30分钟，以固定组织及转导视网膜细胞中的荧光蛋白。固定后，用pH 7.4的无菌PBS洗涤样本5分钟。