收获重组蛋白 埃及伊蚊 感染细胞中的浓核病毒

从一个含有感染了重组病毒的蚊源性上皮细胞培养物的培养瓶开始 埃及伊蚊 浓核病毒

使用玻璃滴管将培养基上下吹打，使细胞从培养瓶表面脱落。

将细胞悬液转移至离心管中。

在超低温条件下孵育以冻存细胞。

解冻细胞并涡旋混匀。

这会导致细胞裂解并释放细胞内含物，包括病毒颗粒。

重复多次冻融循环，以确保所有细胞完全裂解。

在低温条件下离心裂解液，以沉淀细胞碎片。

收集含有病毒颗粒的上清液。

使用注射器滤器过滤，以去除任何残留的污染物。

将含有病毒颗粒的滤液分装，并在超低温条件下保存，直至进一步使用。

转染五天后，使用5毫升玻璃滴管，通过上下吹打培养基，使培养皿中的细胞脱落并重悬。

将每个烧瓶中的细胞悬液转移至各自的无菌50毫升离心管中。

为了收获高滴度的重组病毒，转染后需将细胞培养五天。

将单个试管在负80摄氏度或干冰-乙醇浴中冷冻30分钟。然后在37摄氏度下快速解冻，并将细胞悬液涡旋振荡一分钟。

接下来，收集离心后样品的上清液，并弃去沉淀。然后，将上清液通过0.22微米的一次性注射器滤器过滤。分装后，将最终纯化的病毒颗粒贮存于负80摄氏度。