重组浓集病毒介导的蚊虫幼虫基因沉默

取对病毒感染敏感的早期幼虫蚊子幼虫。

将幼虫转移至含有去离子水的烧杯中。

引入编码一种微小RNA的重组浓集病毒，该微小RNA可抑制目标幼虫基因。孵育。

幼虫吸收病毒，病毒随后进入肠道。

摄入的病毒穿过肠道上皮并扩散至其他组织。

病毒通过内吞作用进入幼虫细胞，并将其DNA释放到细胞核中。

病毒DNA产生微小RNA。

在细胞质中，这些微小RNA与RNA诱导的沉默复合体结合。

该复合物结合并切割互补的靶标幼虫mRNA，从而阻止其表达，导致基因沉默。

孵育后，用去离子水清洗幼虫，以去除未摄入的病毒颗粒。

将幼虫转移至含有食物的新培养皿中，以恢复生长。

已沉默目标基因的病毒感染蚊虫幼虫可用于后续实验应用。

用去离子水清洗100条一龄A. albopictus幼虫三次。然后将幼虫转移至含有95毫升去离子水的烧杯中。

加入5毫升rAaeDV病毒原液，在28摄氏度下孵育幼虫24小时。为确保幼虫感染成功，必须使幼虫与病毒感染颗粒共同孵育24至36小时，以获得较高的感染率。孵育结束后，用去离子水清洗幼虫三次，然后将幼虫转移回培养皿中。定期喂食幼虫。