使用硅胶离心柱从表面结合的病毒颗粒中提取病毒RNA

从含有表面结合病毒颗粒的上皮细胞单层开始。
加入变性盐缓冲液并混匀。
该缓冲液可破坏宿主细胞膜，并使病毒衣壳蛋白解聚，从而释放出包括RNA在内的宿主和病毒内容物。同时使RNase失活，防止RNA降解。
使用倒置显微镜确认所有细胞均已裂解。
加入乙醇，并将悬液转移至基于硅胶膜的离心柱中。
乙醇降低RNA的溶解度，促使RNA与硅胶膜之间发生离子相互作用。
未结合的蛋白质、DNA及其他杂质随流出液去除并弃去。
用洗涤缓冲液清洗离心柱，以去除残留的蛋白质。
接着用含乙醇的缓冲液洗涤，以去除污染物。
将离心柱放入新的离心管中，离心以去除残留乙醇。
加入无核酸酶的水，再次离心以收集纯化的RNA。
所获得的宿主与病毒RNA现已可用于后续分析。
为从JUNV Candid 1病毒颗粒中提取病毒RNA，按照生产商提供的试剂盒说明书操作，使用基于离心技术的动物细胞RNA纯化方案，具体如下：根据说明，向每个孔中直接加入350 µL裂解缓冲液RLT以裂解细胞。
反复混匀数次以确保细胞充分裂解。随后使用倒置显微镜观察，确认无完整细胞存在即表示裂解完成。此时病毒已被灭活，因此只要试剂盒离心管未受污染，后续步骤可在二级生物安全柜外进行。
将裂解液转移至试剂盒提供的离心柱中，并按照说明书继续后续步骤。包含生产商说明书中的可选步骤9，即对离心柱进行额外一次离心，以彻底去除可能残留的RPE缓冲液。最后一步中，使用30 µL无核酸酶的双蒸水从离心柱中洗脱纯化的RNA。
将RNA在-80 °C下保存，或直接用于qRT-PCR检测。