0 次观看 • 2:46 分钟 • July 31st, 2026
从一个含有贴壁哺乳动物细胞培养物的多孔板开始。
这些细胞经过基因工程改造，可表达带绿色荧光蛋白标签的人类血管紧张素转换酶2受体（ACE2-GFP）。
移除培养基。
用成像培养基洗涤细胞，以去除残留的培养基。
在成像培养基中加入阻断剂以最大限度减少非特异性结合，制备量子点-刺突蛋白（QD-Spike）的系列稀释液。
QD-Spike 模拟由荧光量子点与冠状病毒刺突蛋白结合而成的假病毒。
将每种稀释液加入到不同的孔中，并进行孵育。
刺突蛋白特异性地结合于宿主细胞膜上的 ACE2-GFP 受体。
这种相互作用会触发受体介导的内吞作用，导致量子点-刺突蛋白复合物被内化。
孵育后，使用共聚焦成像技术捕获细胞内荧光信号。
较高浓度的QD-Spike产生更强的细胞内荧光，证实刺突蛋白的结合具有浓度依赖性。
此外，QD-Spike 与 ACE2-GFP 的共定位证实了受体介导的内吞作用。
配制0.1% BSA：将130微升7.5% BSA加入10毫升成像培养基中混合。进行6.1倍三倍系列稀释时，取14.26微升QD Spike加入285.74微升0.1% BSA中，以配制最高浓度为20纳摩尔的溶液。
然后，将100微升20纳摩尔或QD Spike加入200微升0.1% BSA中，配制得到6.67纳摩尔QD Spike的第二步稀释液。使用多通道吸液器完全移除每个孔中的旧培养基，用多通道移液器以每孔100微升成像培养基洗涤一次，随后吸除100微升成像培养基。每孔重新加入50微升QD Spike溶液，在37°C、5% CO2的湿润化培养箱中孵育3小时。