为什么零假设检验对于量子点-刺突蛋白摄取量化的准确性至关重要？

零假设检验可确保细胞内荧光的观察差异具有统计学显著性，从而为刺突蛋白-ACE2介导的病毒入侵靶点验证提供可靠支持。

独立变量隔离如何增强量子点-刺突蛋白剂量反应分析？

将量子点-刺突蛋白浓度作为自变量进行分离，可精确归因其摄取效应，从而加强发现流程中的机制性认识。

该实验中定量的细胞内荧光测量能够实现什么？

定量荧光读数可实现剂量依赖性摄取的直接比较，有助于对进入抑制剂和机制假说进行可靠评估。

为什么在跨功能成像研究中，重复性要求至关重要？

在不同孔和实验之间进行重复，可确保结果的可重复性，从而在发现、筛选和转化研究团队之间实现可靠的数据共享与决策。

在实施量子点-尖峰成像（QD-Spike imaging）之前需要具备哪些统计分析能力？

团队需要统计工具来分析荧光强度分布并验证剂量依赖性效应，以支持严格的项目推进决策。

可视化剂量依赖性刺突蛋白摄取的量子点偶联物技术

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 2:46 分钟 • July 31st, 2026

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从一个含有贴壁哺乳动物细胞培养物的多孔板开始。

这些细胞经过基因工程改造，可表达带绿色荧光蛋白标签的人类血管紧张素转换酶2受体（ACE2-GFP）。

移除培养基。

用成像培养基洗涤细胞，以去除残留的培养基。

在成像培养基中加入阻断剂以最大限度减少非特异性结合，制备量子点-刺突蛋白（QD-Spike）的系列稀释液。

QD-Spike 模拟由荧光量子点与冠状病毒刺突蛋白结合而成的假病毒。

将每种稀释液加入到不同的孔中，并进行孵育。

刺突蛋白特异性地结合于宿主细胞膜上的 ACE2-GFP 受体。

这种相互作用会触发受体介导的内吞作用，导致量子点-刺突蛋白复合物被内化。

孵育后，使用共聚焦成像技术捕获细胞内荧光信号。

较高浓度的QD-Spike产生更强的细胞内荧光，证实刺突蛋白的结合具有浓度依赖性。

此外，QD-Spike 与 ACE2-GFP 的共定位证实了受体介导的内吞作用。

配制0.1% BSA：将130微升7.5% BSA加入10毫升成像培养基中混合。进行6.1倍三倍系列稀释时，取14.26微升QD Spike加入285.74微升0.1% BSA中，以配制最高浓度为20纳摩尔的溶液。

然后，将100微升20纳摩尔或QD Spike加入200微升0.1% BSA中，配制得到6.67纳摩尔QD Spike的第二步稀释液。使用多通道吸液器完全移除每个孔中的旧培养基，用多通道移液器以每孔100微升成像培养基洗涤一次，随后吸除100微升成像培养基。每孔重新加入50微升QD Spike溶液，在37°C、5% CO2的湿润化培养箱中孵育3小时。