使用定量逆转录聚合酶链式反应检测丙型肝炎病毒载量

从含有丙型肝炎病毒（HCV）RNA 的总细胞 RNA 开始。
以已知拷贝数的 HCV RNA 作为标准品。
加入含有逆转录酶、DNA 合成原料、HCV 特异性引物的缓冲液，启动逆转录反应以合成互补 DNA（cDNA）。随后降解病毒 RNA。
加入含有 HCV 特异性引物、DNA 聚合酶、DNA 合成原料和荧光染料的缓冲液。
启动定量 PCR 的热循环程序。
引物和 DNA 聚合酶结合至单链 DNA，并合成双链 DNA（dsDNA）。
染料与 dsDNA 结合，产生可检测的荧光信号。
随后通过加热使 DNA 双链分离，降温促进引物结合，进而合成新的双链 DNA。
随着循环次数增加，dsDNA 拷贝数呈指数增长，荧光染料信号也随之增强。
与标准品相比，荧光信号早期上升提示病毒载量较高，而信号延迟上升则提示感染细胞中的病毒载量较低。

使用逆转录酶和特异性引物，在0.2毫升离心管中对一微克总细胞RNA进行逆转录，该引物可结合丙型肝炎病毒（HCV）正义链的5'非翻译区。同时，使用HCV正义链引物，通过实时PCR系统对已知基因组拷贝数的F-N-X-H-C-V-R-N-A进行逆转录。

使用50纳克经转录获得的cDNA，采用特异性的HCV引物以及含有DNA结合绿色染料的QPCR超混合液进行QPCR。运行QPCR时采用以下条件以测定HCV RNA拷贝数