从蚊虫匀浆物中分离蚊媒相关病毒

取一块多孔板，其中含有在培养基中生长的成纤维细胞样哺乳动物细胞。
移除培养基，将含有蚊媒病毒的蚊虫匀浆上清液加入孔中。
在轻度振荡条件下孵育，以促进病毒吸附至细胞表面，并防止细胞干燥。
移除上清液，冲洗孔板以去除未结合的病毒。
加入新鲜培养基，再次进行孵育。
在孵育过程中，病毒进入细胞，将其基因组释放到细胞质中，在此处进行复制并产生病毒蛋白，进而组装成新的病毒颗粒。
这些新形成的病毒颗粒从感染细胞出芽，并扩散感染邻近细胞。
受感染细胞表现出应激诱导的变圆、死亡和脱落，称为细胞病变效应。
在光学显微镜下观察这些提示病毒成功感染的细胞病变特征。
将孔中的上清液转移至离心管中。
含有已分离蚊媒病毒的上清液即可用于后续处理。

从24孔板中移除细胞培养基，并向每孔加入100微升细胞培养维持培养基。

然后用100微升蚊子匀浆上清液或P0接种细胞。将培养板在28或37摄氏度下孵育60分钟，每隔15分钟轻轻摇动培养板，以防止细胞干燥。

操作完成后，吸除上清液，并用600微升细胞培养维持培养基冲洗每个孔，以彻底去除碎片。随后，在每个孔中加入800微升细胞培养维持培养基，将培养板置于含5%二氧化碳的湿润培养箱中，在28或37摄氏度下培养7天。

每天在显微镜下观察每个孔中细胞的状态。第七天，收集称为 P1 的细胞上清液，并于 -80 摄氏度保存。重复该操作，收集 P2 和 P3 病毒上清液。