从Borrelia burgdorferi中纯化噬菌体

取一悬液，其中含有感染了伯氏疏螺旋体噬菌体的Borrelia burgdorferi细菌。

离心悬浮液，收集含有噬菌体颗粒和细胞碎片的上清液。

加入盐溶液并振荡孵育。

盐溶液能够实现噬菌体颗粒与宿主来源的残留大分子的分离。

离心悬浮液并收集含有噬菌体颗粒的上清液。

加入聚乙二醇（PEG），它作为一种分子拥挤剂，可促进噬菌体颗粒的沉淀。

冰上孵育，然后离心。

弃去上清液。

将沉淀重悬于缓冲液中，然后转移至微量离心管。

用氯仿处理以溶解基于脂质的细胞碎片。

离心试管并收集含有伯氏疏螺旋体噬菌体的上层水相。

重复加入氯仿、混匀、离心和收集步骤，以确保完全去除污染物。

将分离的噬菌体颗粒在低温条件下保存，以供后续使用。

将制备好的培养物补充 manuscript 中所述的适当浓度的抗生素，并在 33 摄氏度下孵育样品 72 至 96 小时。为制备 PEG 沉淀溶液，按照 manuscript 中的描述，配制 500 毫升 5 摩尔氯化钠溶液、500 毫升 40% PEG 溶液以及 100 毫升悬浮培养基。为进行灭菌，将溶液高压灭菌，使用前冷却，并在室温或 4 摄氏度下保存。

对于从供体 Borrelia burgdorferi 克隆中通过 PEG 沉淀噬菌体的操作，在培养 72 至 96 小时后，于 4 摄氏度下以 8,000 g 离心 20 分钟。将上清液倾入干净的 50 毫升锥形管中，并弃去细胞沉淀。加入五摩尔氯化钠，使其终浓度为一摩尔。

充分混匀后，在室温下轻轻摇动一小时。在4°C条件下，以8,000 g离心10分钟。按照之前的方法，将上清液倾入干净的50毫升锥形管后，向上清液中加入40% PEG-8000溶液，使其终浓度为10%。充分混匀，置于冰上至少一小时，可长达过夜。

按照先前所述方法，在 4 摄氏度下以 8,000 g 离心样品 20 分钟。弃去上清液，并尽可能去除多余的液体，但不得丢失含有噬菌体颗粒的沉淀。用少量悬浮液重悬沉淀，并用悬浮液冲洗瓶壁，以收集可能存在的噬菌体颗粒。

根据重悬体积，向回收的噬菌体样品中加入等体积的氯仿。充分混匀样品后，在8,000 g 离心10分钟。随后，将水相转移至洁净离心管中，注意避免接触任何厚实的界面层。

在确定第一次氯仿处理后回收的体积后，再次用相当于该体积10%的氯仿处理样品。转移水相至洁净的离心管中，注意避免混入任何界面或有机相。立即使用噬菌体，或将其在4摄氏度下保存。