螺旋体细菌中噬菌体介导的基因递送

取一培养经基因改造的螺旋体细菌。这些细菌携带庆大霉素抗性基因。

将噬菌体悬液加入细菌培养物中。

噬菌体携带编码卡那霉素抗性基因的质粒DNA。

孵育该混合物。

噬菌体附着在细菌表面并将DNA注入细胞内。

该质粒可独立复制，并在细菌分裂时传递给子代细胞。

将孵育后的培养物与添加了庆大霉素和卡那霉素的熔融琼脂糖培养基混合。

将混合物倒入培养皿中。待其凝固后进行培养。

在双重抗生素筛选条件下，只有同时携带两种抗性标记的细胞才能生长并形成菌落，而其余细胞则会死亡。

挑取单菌落，接种至含有两种抗生素的培养基中。

孵育以促进携带转导质粒的细菌生长，以便进行后续下游分析。

弃去上清液，并将沉淀重悬于14.5毫升新鲜BSK培养基中。向受体克隆的培养物中加入不超过500微升的PEG沉淀噬菌体样品。

充分混匀后，在33摄氏度下孵育72至96小时。按照文中所述，使用聚乙二醇沉淀的噬菌体与菌液混合后，通过固体培养基平板法筛选转导子。根据受体克隆的背景，孵育10至21天后检查选择性平板上琼脂糖内部是否出现菌落。

使用灭菌的带棉塞5.75英寸硼硅酸盐吸管，挑取在含两种抗生素的平板上生长的至少5至10个菌落，并将其接种到1.5毫升含有适当抗生素的BSK培养基中。