从细菌裂解液中纯化噬菌体

从含有噬菌体、宿主细菌碎片及残余未裂解细菌的细菌裂解液开始。

离心以沉淀残留的细菌和较大碎片。

收集上清液，并通过膜过滤以去除残留的较大污染物。

将滤液转移至新离心管中，并加入氯仿。

涡旋混匀并孵育。氯仿可杀死残留的细菌并防止细菌生长。

离心以分离氯仿和含有噬菌体的水相层。

将水相转移至离心过滤装置中，并进行离心。

滤膜允许液体和较小的污染物流出，同时将噬菌体保留在装置内。

继续离心，直至液面下降，使噬菌体浓缩于较小体积中。

弃去滤液，然后用移液器反复吹打以重悬浓缩的噬菌体。

加入缓冲液，再次离心以去除过量缓冲液。

加入新鲜缓冲液，并将纯化后的噬菌体收集到新的离心管中，用于后续研究。

当T4噬菌体裂解液变澄清后，将其收集到一个50毫升的锥形管中。在4,000 g 条件下离心20分钟，以沉淀残留的细菌和细胞碎片。

使用0.22微米尼龙滤器对所得上清液进行过滤除菌，并将滤液收集至新的50毫升离心管中。向过滤后的T4噬菌体裂解液中加入0.1倍体积的氯仿，以杀灭残留的细菌并防止细菌生长。短暂涡旋混匀，然后将裂解液在室温下孵育10分钟。

将裂解液在 4,000 g 条件下离心 5 分钟，以分离氯仿与裂解液。使用刻度移液管，小心地将上层裂解液转移至新的 50 毫升离心管中。向 100 千道尔顿离心过滤装置的上层储液室加入 13 毫升噬菌体裂解液。

在4,000 g 条件下离心5分钟，或直至大部分裂解液通过滤膜。使用P200或P1000移液器，轻轻吹打上层储液室中剩余的2毫升裂解液，以疏通滤膜。将下层储液室中的滤液弃入废液容器中。

重复浓缩操作，保留约 2 毫升浓缩的噬菌体于上层储液室中。最后一次离心后，轻柔地用移液器将上层储液室中剩余的裂解液上下吹打混匀。为洗涤噬菌体裂解液，向上层储液室中加入 12 毫升氯化钠-镁溶液（saline magnesium）或 SM 缓冲液，然后在 4,000 g 条件下离心 10 分钟。

第二次洗涤后，将剩余的2毫升裂解液用SM缓冲液重悬，最终体积为10毫升。将裂解液转移至50毫升离心管中，并在4摄氏度下保存。