聚乙烯亚胺介导的胚胎肾细胞转染以生产重组病毒

从含有编码病毒基因组、目的基因以及病毒蛋白的质粒溶液开始。

将质粒加入含有聚乙烯亚胺的溶液中，并充分混匀。

带正电荷的聚乙烯亚胺与带负电荷的 DNA 形成复合物。

孵育以稳定复合物。

将复合物逐滴加入胚胎肾细胞的单层中。

孵育以通过内吞作用实现细胞摄取。

聚乙烯亚胺促进内体逃逸，将DNA释放到细胞质中。

更换培养基以去除残留的复合物，并进行孵育。

在细胞内，质粒指导病毒蛋白的合成以及携带目的基因的病毒RNA基因组的产生。

病毒颗粒在细胞质中组装并释放到培养基中。

收集含有病毒颗粒的上清液，并加入新鲜培养基以维持病毒颗粒的产生。

离心培养基以去除碎片，过滤富含病毒的上清液，并将其在低温下保存。

慢病毒颗粒的制备是一个为期五天的实验流程，首先将HEK293T细胞以60%至80%的融合度接种于盛有细胞培养基的162平方厘米培养瓶中。将细胞置于37摄氏度、湿润的细胞培养孵箱中过夜培养。次日，按照实验方案文本所述，配制DNA转染溶液和聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）转染溶液。

将DNA转染溶液加入PEI溶液中。涡旋混匀或反复倒置数次，在室温下孵育5分钟。将2毫升DNA转染液与PEI的混合溶液滴加到HEK293T细胞上，在37摄氏度下孵育4小时。

4小时后，更换培养基以去除PEI。将细胞在37摄氏度下继续培养两天。第4天，将上清液收集至50毫升离心管中。向细胞中加入新鲜培养基，并将培养瓶放回培养箱。将收集的上清液在500 g 条件下离心5分钟，以去除死细胞。

然后使用一个60毫升的大注射器将上清液通过0.45微米的滤器。将过滤后的上清液在4摄氏度下保存过夜。