利用慢病毒载体将基因递送至小鼠肠道类器官

从部分解离的小鼠肠道类器官开始，以促进慢病毒转导。

将慢病毒载体加入转导培养基中。

慢病毒携带一个目的基因，可稳定整合到宿主基因组中。

将慢病毒加入孔中。

孵育混合物以促进病毒进入。

病毒RNA被逆转录为DNA，并整合到宿主基因组中。

加入类器官培养基，并将混合物转移至离心管中。

离心以去除任何未结合的病毒。

将沉淀物混入基底膜基质中。

将类器官放入孔中，并使其凝固。

基质形成一种网络，可捕获类器官并提供结构支持。

加入添加了生长促进剂的类器官培养基，以支持类器官的增殖。

这将形成含有转导基因的出芽类器官，可用于进一步的功能分析。

将此少量残留培养基中的类器官转移至48孔板的一个孔中。

将先前制备的高滴度慢病毒加入转导培养基中，加入类器官并重悬。将类器官-病毒混合物于37摄氏度培养箱中孵育1小时，以实现转导。1小时后，向类器官-病毒混合物中加入1毫升类器官培养基，重悬后转移至微量离心管中，在850 × g条件下离心5分钟。

为沉淀类器官，移除上清液，并将沉淀重悬于20 µL预冷的Matrigel中。将液滴置于孔板中央。在37 °C下孵育15分钟，使液滴凝固。15分钟后，小心加入250 µL添加了烟酰胺和激酶抑制剂的类器官培养基。