用于免疫组织化学分析的慢病毒转导小鼠肠道类器官的处理

取一个含有嵌入凝胶基质中的小鼠肠道类器官的多孔板。
使用慢病毒将报告基因转导至类器官细胞中。该基因表达一种报告蛋白。
向孔中加入固定剂，以保存类器官组织的形态结构。
用缓冲液洗涤，去除残留的固定剂。
将类器官重悬于缓冲液中，转移至玻璃小瓶，并使其沉降。
用含伊红染料的乙醇替换缓冲液，对类器官进行染色以便观察。
用浓度递增的乙醇处理类器官，以实现脱水。
加入二甲苯以提高组织透明度。
倾去二甲苯，加入熔化的石蜡，并在高温下孵育，使石蜡渗透组织。
更换新鲜石蜡，确保组织完全浸透。
将类器官转移至含有石蜡的模具中，居中放置，并让石蜡固化。
加入额外的石蜡，并插入包埋盒。
石蜡包埋的慢病毒转导类器官现已准备好用于免疫组织化学分析。

从一个长满类器官的单孔中移除培养基，保持包埋的类器官完整，然后直接向孔中加入一毫升含4%多聚甲醛的PBS溶液。用一毫升PBS替换多聚甲醛溶液。

将固定的类器官重悬于 PBS 中，并转移至玻璃小瓶。静置一分钟，使类器官沉降至底部。随后用移液器小心吸除 PBS，加入含有数滴伊红溶液的 70% 乙醇，以便在包埋过程中可视化类器官。将类器官置于室温下的 70% 乙醇中 30 分钟。小心用移液器移除 70% 乙醇。由于伊红染色呈粉红色，类器官可用肉眼观察到。

将包埋液替换为96%乙醇，在室温下放置30分钟。随后，依次将类器官通过70%乙醇、90%乙醇、96%乙醇、100%乙醇、100%乙醇、二甲苯和二甲苯进行处理。倒掉最后一次的二甲苯洗涤液，向玻璃小瓶中倒入石蜡。

立即将小瓶放入预热至70摄氏度的铝块中，孵育30分钟。30分钟后，用预热的巴斯德吸管更换为新鲜干净的石蜡。倒出石蜡，使用带有较大开口的预热巴斯德吸管，将类器官转移至石蜡包埋模具中的液态石蜡层内。

用本生灯加热解剖针，尽可能将所有类器官移至石蜡包埋模具的中央。当类器官在模具中的位置满意后，轻微冷却模具以固化表层石蜡。随后在顶部倒入更多石蜡完成包埋，并加入标准的组织学包埋盒。