用于活体成像的报告基因表达癌细胞的制备

从贴壁的人类乳腺癌细胞开始。
加入携带由 TGF-β/Smad 响应性启动子调控的荧光素酶报告基因的重组腺病毒，并进行孵育。
腺病毒与细胞结合后进入细胞并递送 DNA。
随后，内源性的 TGF-β/Smad3 信号通路激活 Smad3 转录因子，后者结合至启动子区域，启动荧光素酶的表达。
移除培养基以清除细胞外病毒，并用缓冲液洗涤。
加入胰蛋白酶-EDTA，轻轻振荡并孵育，使细胞从培养表面脱落。
加入中和液以终止胰蛋白酶的作用，并收集细胞悬液。
离心以分离细胞，弃去含有胰蛋白酶-EDTA 的上清液。
将细胞重悬于新鲜培养基中，并转移至离心管。
加入基底膜基质。
将表达荧光素酶的细胞置于低温保存，以备后续分析。
在肿瘤移植前 48 小时，将约 2.5 × 10⁶ 个 MDA-MB-231 细胞接种至 10 个 175 平方厘米的培养瓶中。

培养24小时后，在每个培养瓶中加入300微升腺病毒CAGA12-荧光素酶，然后将细胞放回培养箱继续培养24小时。在移植当天，移除旧的培养基，并用20毫升PBS将感染腺病毒的细胞洗涤一次。向培养瓶中加入2毫升0.05%胰蛋白酶-EDTA，轻轻摇动培养瓶，使胰蛋白酶覆盖整个培养瓶表面。

在37摄氏度下孵育三分钟。然后加入八毫升含FBS的DMEM培养基以终止胰蛋白酶反应。将所有细胞悬液转移至玻璃试剂瓶中。使用血细胞计数板对细胞数量进行计数。

此后，将4.8 × 10⁷个细胞转移至250毫升离心管中，在室温下以400 × g离心5分钟。离心后，将细胞重悬于720微升新鲜培养基中，并将悬液转移至5毫升离心管。然后加入含10% Matrigel的培养基，将细胞悬液稀释至每50微升含3 × 10⁶个细胞。

将细胞悬液转移至无菌的5毫升离心管中，置于冰上保存直至移植。