从人肝癌细胞中收获戊型肝炎病毒颗粒

从转染了戊型肝炎病毒（HEV）RNA的人肝癌细胞培养物开始，以产生病毒颗粒。

一些HEV会获取宿主来源的内体膜并离开细胞，而另一些则以无包膜HEV的形式保留在细胞内。

为收获细胞外的HEV，收集并过滤培养上清液，以去除细胞碎片。

储存于超低温条件下以保持其感染性。

为了收获细胞内HEV，用缓冲液洗涤细胞。

加入胰蛋白酶-EDTA 以消化细胞，随后加入培养基以终止酶活性。

将悬液转移至离心管中并进行离心。

弃去含有残留胰蛋白酶的上清液。重悬沉淀，并将其转移至一个离心管中。

将细胞在液氮中冷冻，然后在冰上解冻。

重复冻融循环以裂解细胞，释放病毒。

离心，收集含有病毒的上清液，并在超低温条件下储存。

第6天，将上清液通过0.45微米滤膜过滤，以去除任何细胞碎片，并将收获的细胞外源性甲型肝炎病毒在4摄氏度下保存。对于细胞内源性甲型肝炎病毒颗粒的收获，用PBS洗涤细胞，并在37摄氏度下用1.5毫升0.05%胰蛋白酶-EDTA使细胞脱落。当细胞脱落后，加入8.5毫升DMEM终止反应，并将细胞悬液转移至50毫升离心管中进行离心。

每电穿孔加入 1.6 毫升完全 DMEM 培养基至各 2 毫升反应管中，并用其中 800 微升培养基重悬细胞，从而将细胞转移至管中。将细胞在液氮中迅速冷冻，随后在冰上反复冻融三次，再将所得裂解物在 10,000 × g 条件下高速离心 10 分钟。然后将上清液转移至新管中，避免扰动细胞碎片沉淀，于 -80 °C 保存。