从鸡胚尿囊液中纯化病毒

从感染病毒的鸡胚蛋中收获的羊水开始，将其置于储液器中。

该液体含有病毒颗粒以及宿主来源的污染物。

将液体通过深层滤器，以截留较大的污染物，同时允许较小的污染物和病毒通过。

然后，将过滤后的液体加入过滤系统，使其沿膜表面进行切向流动。

较小的污染物通过膜，而病毒则被截留并浓缩。

将浓缩的病毒上样至密度梯度中并进行离心。病毒在其密度与梯度相匹配的位置形成一条明显的条带。

将富含病毒的条带收集到透析盒中，并置于缓冲液中。梯度组分通过半透膜扩散到外部，而缓冲液中的水则通过半透膜扩散进入透析盒内。

接下来，将滤器置于高渗溶液中，通过渗透作用吸出水分，从而浓缩纯化的病毒。

为了纯化新城疫病毒（Newcastle Disease Virus 或 NDV），首先使用 50 毫升 PBS 运行预先设置的实验系统进行预处理。

当管中剩余约五毫升 PBS 时，停止泵的运行。接下来，将一个截留等级为 1 至 3 微米的深层滤器连接到管路上。为对滤器排气，移除深层滤器顶端一侧的第二个盖帽，然后开始向系统中通入额外的 50 毫升 PBS。

当 PBS 开始从滤器顶部的通气口流出时，关闭该端口，并继续让 PBS 流经管路。随后，将废液容器更换为新的无菌收集容器，并开始将羊水液通过深层滤器。接下来，将切向流过滤（TFF）系统设置为开放构型，并按照文中所述方法运行。

当储液器中剩余约五毫升液体时，暂停泵的运行，并向储液器中补充已进行深层过滤的羊水。然后恢复泵的流速。为防止病毒受到剪切损伤，必须确保系统压力不超过10磅力每平方英寸（10 psi）。

为提高洗脱效果，应结合使用蠕动泵的流速和C型夹。在储液罐中保留150至100毫升的尿囊液，暂停泵运行，并通过加入150至200毫升ML缓冲液更换缓冲液。当储液罐中剩余液体为5至10毫升时再次暂停泵，然后使用两个C型夹关闭废液管路。

断开向储液罐供液的截留液管路，并将其插入一个 50 毫升的锥形管中。然后恢复液体流动，当储液罐中剩余少量液滴时暂停。接下来，从废液管路上拆下 C 型夹，并将截留液进液管路重新连接至储液罐。

同时，为准备碘克沙醇密度梯度超速离心，首先向一支13.2毫升开口薄壁超速离心管中加入0.5毫升40%碘克沙醇。然后依次加入2.5毫升20%碘克沙醇和2.5毫升10%碘克沙醇，以制备梯度柱。在超速离心前，小心地将6至6.5毫升从TFF系统洗脱出的病毒溶液加至碘克沙醇梯度柱上，注意不要扰动梯度。

超速离心后，使用无菌镊子取出离心管。目标条带应位于10%和20%梯度之间，呈较宽的条带。接下来，使用铁架台将离心管悬置于烧杯上方。

随后，将一根18号、1.5英寸长的针头连接至5毫升注射器上，用针头刺穿超速离心管的侧壁，通过缓慢推出活塞来收集目标条带。按照文中所述方法从病毒溶液中去除碘克沙醇后，使用注射器将病毒溶液小心地注入透析盒中。为浓缩病毒溶液，需将透析盒从透析缓冲液中取出，并放入一个小的可密封塑料袋中。

然后加入15至25毫升40%聚乙二醇至透析袋中，使透析盒完全浸没。