0 次观看 • 3:41 分钟 • August 31st, 2026
从含有入肺上皮细胞的试管开始。
加入生物素标记的流感病毒，并在冰上孵育。病毒会结合到细胞表面而不会被内化。
离心以分离与病毒结合的细胞，弃去上清液并重悬。
在初始时间点的试管中加入未标记的链霉亲和素，其会与生物素化的病毒结合，形成复合物。
加入荧光标记的链霉亲和素，该物质无法与链霉亲和素-生物素病毒复合物结合。洗涤并固定细胞。
将较晚时间点的试管置于较高温度下孵育，以促进病毒内化，然后放回冰上。
加入未标记的链霉亲和素和一种抑制内化的阻断剂，以防止进一步的病毒摄取，并进行孵育。链霉亲和素会结合细胞表面结合的生物素化病毒，然后洗涤。
固定细胞并加入含有去垢剂的缓冲液以使其通透。
洗涤后加入荧光标记的链霉亲和素，该物质可进入细胞并与生物素结合。
通过流式细胞术分析样品。
较晚时间点的荧光信号更强，表明病毒成功实现了内化。
再重复洗涤一次后，将离心管置于冰上冷却10分钟。待离心管冷却后，再次离心，并加入100 μL用感染用PBS稀释的生物素化病毒，重悬沉淀物，冰上孵育1小时。随后再次离心，并用PBS洗涤两次。尽可能并行处理零分钟时间点的以下样品。
处理0分钟加STV样品时，离心试管，弃去上清液，加入15微升含2% BSA和0.1%叠氮化钠的PBS-STV溶液重悬细胞沉淀。冰上孵育30分钟。然后离心，并在PFA固定后如前所述用PBS洗涤细胞两次，将样品置于4摄氏度保存。
对于30分钟及以上的STV样品，离心后在37摄氏度孵育30分钟，然后用200微升含2% BSA的PBS重悬样品。
将细胞在含2% BSA和0.1%叠氮化钠的PBS中用50 µL STV重悬，涡旋后置于冰上孵育30分钟，随后洗涤并固定。接着，按照文本方案中的详细步骤，对所有样品进行通透处理并用STV-Cy3染色，然后将样品储存在4°C。最后，通过流式细胞术分析样品。