用于普遍性转导的噬菌体裂解液的制备

从含有钙离子的培养基中接种带有可筛选标记的细菌菌株开始。

加入噬菌体。

短暂孵育，以促进依赖钙离子的噬菌体吸附及DNA注入。

加入含钙离子的熔融软琼脂，涡旋混匀，覆盖于预热的琼脂平板上，然后孵育。

噬菌体编码的核酸酶会降解宿主 DNA，同时噬菌体基因组进行复制、表达蛋白质，并组装新的感染性颗粒。

某些噬菌体偶然包裹了宿主DNA，包括可筛选标记，从而形成转导颗粒。

宿主细胞裂解并释放出感染性颗粒和转导颗粒。

感染性颗粒扩散至邻近细胞，形成空斑。

孵育后，刮取含有噬菌体的软琼脂层，并将其转移至离心管中。

加入含有氯仿的培养基并充分涡旋，以裂解残留的宿主细胞。

离心以去除碎片，并收集上清液。

所得的噬菌体裂解液含有用于进一步分析的转导颗粒。

为了感染含有基于可切除抗生素盒的基因敲除的供体菌株，首先将细菌在含有10毫摩尔氯化钙的5毫升LB（Lysogeny肉汤）培养基中培养，可选择性地加入25微克/毫升卡那霉素，使其在600纳米处的光密度达到约1.0。将现有的P1噬菌体储备液在LB培养基中进行系列稀释，然后在各自的15毫升离心管中，将200微升细菌悬液与100微升各噬菌体稀释液混合。在37摄氏度下静置孵育20分钟。

孵育结束后，向各试管中加入约三毫升融化的顶层琼脂，并补充十毫摩尔的氯化钙。通过涡旋振荡充分混匀内容物，然后将混合物倒入预热的LB平板中，形成均匀的覆盖层。随后，将平板在37摄氏度下过夜孵育。

次日早晨，选取一个噬菌斑呈半融合生长的平板，用接种环将顶层琼脂刮入离心管中。在通风橱内，向管中加入一至二毫升 LB 培养基和一滴氯仿，剧烈涡旋震荡一分钟。通过离心使琼脂和细菌沉淀，小心转移上清液至微量离心管中，避免带入沉淀中的杂质。

然后加入两滴氯仿，并将裂解液置于 4 至 10 摄氏度下保存。