使用核苷类似物标记复制中的HSV-1基因组

取处于静止期且DNA复制极少的哺乳动物细胞培养物，收集条件培养基。

加入单纯疱疹病毒（HSV），并轻轻振荡孵育以促进病毒吸附。洗涤以去除未结合的病毒，并重新加入条件培养基。

孵育后，病毒与宿主细胞膜融合，将核衣壳释放到细胞质中。

病毒的双链DNA进入细胞核，环化，并表达病毒蛋白以进行病毒DNA复制。

病毒和宿主蛋白解开病毒DNA并合成RNA引物。随后，病毒DNA聚合酶复合物结合并延伸引物以进行DNA合成。

随着复制的进行，向培养物中加入核苷类似物。该物质进入细胞后被转化为三磷酸形式。

由于宿主DNA复制极少，该类似物优先掺入正在复制的病毒DNA中，从而标记病毒基因组。

标记的病毒基因组已准备好用于相关蛋白的下游蛋白质组学分析。

按照文本方案所述，首先培养 MRC-5 细胞。然后，将 HSV-1 溶于冷的 Tris 缓冲盐水（TBS）中。在后续步骤中，重要的是关闭吹风机和组织培养罩，以防止细胞干燥。

使用移液器将 MRC-5 细胞的培养基转移至无菌瓶中，待感染后加回细胞。通过向细胞中加入七毫升稀释后的病毒进行感染。在室温下每 10 分钟轻轻摇动细胞一次，持续 1 小时。

吸附完成后，吸除接种液，用50毫升室温TBS洗涤细胞，并更换为原始生长培养基。随后，在37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养细胞。在病毒感染后约4小时，即病毒DNA复制开始时，对正在复制的病毒DNA进行标记。

为此，将 EdC 溶于 1 毫升生长培养基中，并加入感染细胞的细胞培养基中孵育 2 至 4 小时。