大规模生产高容量腺病毒载体

取一个带有磁力搅拌子的储存瓶，其中含有表达Cre重组酶的哺乳动物细胞悬浮液。
用一种缺乏病毒基因的高容量腺病毒载体同时感染细胞，该载体可携带较大的外源DNA片段，再辅以携带腺病毒基因的辅助病毒共同感染。
搅拌悬浮液以促进病毒和载体进入细胞。
将细胞转移至含有预热培养基的高容量旋转培养瓶中，在持续搅拌条件下孵育，以支持大规模载体生产。
辅助病毒编码腺病毒蛋白，而Cre重组酶则切除其包装信号，从而阻止辅助病毒的衣壳化。
与此同时，载体基因组利用辅助病毒提供的蛋白进行复制，并组装成腺病毒颗粒。
将感染后的细胞转移至离心管中，离心以沉淀细胞。
弃去上清液，并将沉淀物重悬于少量缓冲液中。
将感染的细胞悬浮液置于低温下保存，用于后续分析。

将细胞转移至含有无菌磁力搅拌子的250毫升储存瓶中。随后，用第3代裂解液和每细胞2个转导单位的辅助病毒共同感染细胞。此处细胞总数约为9 × 10⁸个，因此需加入1.8 × 10⁹个转导单位。

将细胞病毒混合物置于组织培养孵育箱中，以 60 RPM 的转速在磁力搅拌器上搅拌 2 小时。确保储存瓶未完全封闭，以允许空气流通。

感染后两小时，将细胞与病毒混合液的全部体积转移回三升的悬浮培养烧瓶中。加入1850毫升新鲜的预热培养基，在组织培养孵箱中于70 RPM条件下孵育48小时。

48小时后，将细胞病毒悬液转移至500毫升离心管中，然后在890 × g条件下离心10分钟 g 在室温下，移除培养基，并将沉淀的细胞重悬于总体积为28毫升的DPBS中。将细胞病毒悬液储存于-80摄氏度，直至进行病毒纯化。