利用腺相关病毒载体转导人源化大鼠肝脏

从一个包含经人肝细胞重接种的去细胞化大鼠肝脏支架的生物反应器系统开始。

支架被维持在循环培养基以提供营养的流动系统中。

用含有重组腺相关病毒载体的缓冲液填充注射器。

该载体携带含荧光报告基因和基因沉默 RNA 的反向互补 DNA 及转录单元。

停止培养基流动，并断开进液管路。

通过供应支架的主要血管注射载体。

孵育以促进载体与细胞的相互作用。

该载体通过受体介导的内吞作用进入肝细胞。

进入细胞后，该载体可从内体中逃逸，并将其自互补 DNA 释放到细胞核中。

自互补DNA可实现外源基因的直接表达，产生荧光蛋白和基因沉默RNA。

逐步恢复培养基流动，以重建支架内的循环。

转导后的肝脏模型现已适用于后续分析。

现在对肝脏模型进行转导。首先，将5 mL PBS中含2.7×10¹³个病毒载体的溶液吸入注射器中。可选择性地加入酚红，终浓度为5 µg/mL。

然后将肝脏与培养基循环系统断开，并将载体注入系统中。注入后，在不泵送的条件下孵育系统1小时。随后按照先前所述逐步增加流速。

随后，在转导后的肝脏培养六天期间，每隔一天更换 50 毫升培养基。