使用逐步蔗糖离心法制备病毒富集悬液

从含有蔗糖梯度的超速离心管开始。

小心地将含有病毒的上清液加至顶部。

采用可控加速和减速方式进行离心，以保持梯度完整，使颗粒在离心过程中沉降至与其浮力密度相匹配的层中。

较轻的蛋白质保留在上层，完整的病毒颗粒聚集在低密度层与高密度层之间，而较重的细胞碎片则沉降至底部。

弃去上层液体，收集中间富含病毒的蔗糖组分至新的离心管中。

加入缓冲液并反复吹打混匀样品。

接下来，将病毒悬液小心地铺加到新试管中的低密度蔗糖垫上。

离心该悬液。较重的病毒颗粒沉降至底部，而较轻的污染物则留在上清液中。

弃去上清液。将离心管倒置在纸巾上，沥干残留液体。

用缓冲液重悬病毒沉淀。

病毒富集的悬液已准备好用于后续研究。

将不同浓度的蔗糖溶液加入圆锥形超速离心管中，形成蔗糖浓度梯度的分层。

小心地将含有病毒的上清液加至蔗糖梯度中。为处理全部 100 毫升病毒上清液，每次离心使用六根超速离心管。随后，用 1× PBS 缓冲液平衡超速离心管，并在 17 °C 下以 70,000 ×g 离心两小时。

在洁净的离心管中收集 30% 和 60% 蔗糖组分，并加入冷的 1× PBS 缓冲液调节体积至 100 毫升。通过反复吹打数次混匀样品。然后，将 20 至 25 毫升病毒溶液小心地加到含 4 毫升 20% 蔗糖（溶于 1× PBS）的离心管上，以制备蔗糖垫层。

若离心管未达到其总体积的四分之三，需用无菌 1× PBS 缓冲液调整体积并平衡。随后，在 17 °C 下以 70,000 × g 离心两小时。离心后，倒出上清液，并将离心管倒置于纸巾上以排尽残留液体。

吸除最后残留的液滴后，含有病毒的沉淀物仅表现为一个半透明的小点，几乎不可见。接下来，加入70 µL 1× PBS，通过反复吹打充分重悬沉淀。随后，将悬液转移至另一支离心管中，彻底混匀，以完全溶解沉淀物。

然后，用额外的 50 µL 冷的 1× PBS 缓冲液冲洗管壁并混匀。将样品置于台式微量离心机中，在 10,000 ×g 条件下离心 30 秒。离心后，取 10 µL 上清液分装至新的微量离心管中，并于 -80 °C 保存。