0 次观看 • 3:51 分钟 • August 31st, 2026
取含有HIV-1 p24抗原的慢病毒载体，该抗原是一种用于检测的蛋白质标志物。
加入去垢剂以裂解并释放 p24，然后对样本进行连续稀释。
取一块包被有抗p24单克隆抗体的微孔板，并使用封闭剂以防止非特异性结合。
加入样本稀释液以及p24标准品作为参考。
孵育以使p24通过特异性表位与抗体结合，随后去除未结合的组分。
加入可结合 p24 上不同表位的抗-p24 多克隆抗体进行孵育，并洗去未结合的抗体。
加入与多克隆抗体结合的辣根过氧化物酶标记抗体。去除未结合的抗体。
加入一种可转化为有色产物的过氧化物酶底物。
加入酸以灭活过氧化物酶并稳定产物。
测定与颜色强度相对应的吸光度，该吸光度与p24浓度成正比。
绘制标准曲线并估算样品浓度，以确定病毒滴度。
根据美国国立卫生研究院（NIH）艾滋病疫苗计划提供的HIV-1 p24抗原捕获检测试剂盒说明，使用100微升单克隆抗p24抗体（以1:1,500比例稀释）包被高结合力96孔板。于4摄氏度孵育过夜。次日，用200微升含0.05%吐温-20的冷PBS溶液洗涤孔板三次。
为避免非特异性结合，使用200 µL含1%牛血清白蛋白的溶液在室温下封闭平板1小时。然后，用200 µL冷PBS中含0.05% Tween-20的溶液洗涤平板三次。接着，通过用双蒸水和Triton X-100稀释载体，将浓缩和非浓缩的载体样品配制为终浓度10%。
接着，使用两倍倍比稀释法配制起始浓度为每毫升五纳克的HIV-1标准品。将浓缩和非浓缩的载体样品稀释后，取样以每孔100微升加入到酶标板中，每个样品设三个复孔，并在4摄氏度下孵育过夜。次日，洗涤酶标板，然后每孔加入100微升多克隆兔抗p24抗体，在37摄氏度下孵育四小时。
经过六次洗涤后，将酶标板在37摄氏度下与羊抗兔辣根过氧化物酶孵育一小时。多次洗涤后，在室温下加入TMB过氧化物酶底物孵育15分钟。加入1 N盐酸终止反应。使用吸光度酶标仪在450纳米处读取吸光度。