通过质粒转染生成重组腺相关病毒

从悬浮于营养培养基中的质粒混合物开始。

第一个质粒携带编码目的基因的重组腺相关病毒（AAV）基因组。

第二个质粒编码 Rep 和 Cap 蛋白。

第三种质粒编码辅助蛋白。

向质粒溶液中加入转染试剂。充分混匀并孵育。

带正电荷的转染试剂与带负电荷的质粒DNA结合，形成复合物。

将复合物加入哺乳动物细胞的单层中。孵育。

复合物通过内吞作用进入细胞。

在细胞内，质粒编码的基因驱动病毒蛋白的表达。

Rep 蛋白复制病毒基因组，而 Cap 蛋白形成衣壳外壳。

Rep蛋白与辅助蛋白共同将复制的病毒基因组包装入衣壳中，形成完整的AAV颗粒。

携带目的基因的重组腺相关病毒载体已可用于基因递送应用。

根据文本方案构建rAAV9质粒并培养HEK293细胞后，于第一天进行细胞转染时，在一个50毫升离心管中加入70 µg AAV Rep-Cap质粒、70 µg rAAV9质粒和200 µg Ad辅助质粒。向管中加入49 mL不含FBS的室温DMEM，并充分混匀。随后，为获得4:1的PEI与DNA溶液比例，向管中加入1,360 µL PEI溶液，并充分混匀。

将溶液在室温下孵育15至30分钟。孵育结束后，向每个150毫升的细胞培养皿中加入5毫升该溶液。在37摄氏度和5% CO₂条件下培养细胞50至72小时。