诱导前噬菌体裂解复制以进行转录组分析

从携带由噬菌体阻遏蛋白抑制的整合前噬菌体基因组、并维持休眠溶原状态的细菌培养物开始。

加入诱导剂并振荡培养以触发细胞应激。

细胞应激会诱导阻遏蛋白发生自切割，从而使前噬菌体从溶原状态转变为裂解性复制。

前噬菌体DNA从细菌基因组上切离，并依次转录早期调控基因、中期DNA复制基因以及晚期结构基因和裂解基因。

将培养物转移至大量培养基中以稀释诱导剂，并进行孵育以使细胞恢复。

在规定的时间间隔内，加入终止溶液以终止转录，从而保存细菌细胞中的RNA谱型。

离心培养物并弃去上清液。重悬细胞，将悬液转移至小管中，再次离心。

弃去上清液，并将沉淀物快速冷冻以保持RNA完整性。

最后，加入RNA提取试剂并进行匀浆以裂解细胞。样品即可用于RNA分离及后续的转录组分析。

接着，向含有 80 毫升培养液的已标记诱导组烧瓶中加入诺氟沙星，终浓度为 1 微克/毫升。充分混匀后，在 37 摄氏度、180 转/分钟振荡条件下孵育 1 小时。通过将 80 毫升诱导培养物加入 720 毫升 LB 培养基中，使细胞恢复。从 0 到 1 小时，每隔 10 分钟向每个烧瓶中加入终止液，收集细菌细胞。

在 4 °C 条件下以 10,000 ×g 离心 15 分钟，弃去上清液。用可调式自动移液器在残留液体中轻轻重悬沉淀。将悬液转移至 1.5 mL 微量离心管中，在 4 °C 条件下以 13,000 ×g 离心 1 分钟。

弃去残留的上清液，密封微量离心管，然后将沉淀物迅速浸入液氮中进行速冻。向每个冻存的沉淀物中加入1 mL TRIzol，通过移液吹打混匀悬浮液。